Identificación de componentes del Complejo de Poliadenilación en Trypanosoma cruzi: Análisis de la interfase de interacción entre TcCPSF30 y TcFIP1-like y su potencial uso como blanco de drogas

NATALIA BERCOVICH, CATALINA ATORRASAGASTI, MARTIN EDREIRA, MARIANO LEVIN AND MARTIN VAZQUEZ

Mendoza

Congreso; VII Congreso Argentino de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias; 2005

SAP

En trypanosomas el procesamiento del mRNA es de particular importancia dado que la regulación de la expresión génica se da exclusivamente a nivel post-transcripcional. En estos organismos la transcripción de genes que codifican para proteínas es policistrónica y la maduración del pre-mRNA se da por dos reacciones acopladas: Trans-splicing/ Poliadenilación. Por análisis “in silico” del genoma de T.cruzi (http://www.genedb.org) y utilizando como sonda las proteínas que conforman el Complejo de Poliadenilación en mamíferos y levaduras, identificamos 10 posibles ortólogos de factores de Poliadenilación en T.cruzi. En particular, hallamos todos los componentes del complejo CPSF (cleavage and polyadenylation specificity factor). Por ensayos de Doble Híbrido en Levaduras construimos una matriz de interacciones entre estos factores y seleccionamos de allí al par interactuante TcCPSF30/TcFIP1-like sobre el que realizamos un detallado análisis mutacional por deleciones para establecer la mínima interfase de interacción. Sobre esa interfase llevamos a cabo un “Alanine Scan” sobre las caras de ambas proteínas, que nos permitió determinar los aminoácidos críticos involucrados en la interacción. Estos datos fueron usados para generar un modelado estructural in silico de la superficie de contacto entre dichas proteínas. En paralelo se comparó con el mismo par interactuante humano y nuestros resultados indicaron diferencias con el par de T.cruzi que podrían ser explotadas para su uso como blanco de drogas.