Producción del radical hidroxilo, estrés oxidativo y apoptosis en el hígado de ratas diabéticas inducidas por estreptozotocina

FRANCÉS D. E.; RONCO M. T.; INGARAMO P. I.; MONTI J. A.; PISANI G. B.; QUIROGA A. D.; PARODY J. P.; PELLEGRINO J. M.; CARRILLO M. C.; CARNOVALE C. E.

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica -Sociedad Argentina de Fisiología; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica - Sociedad Argentina de Fisiología

Distinguido por sus méritos con el Premio de la Sociedad Argentina de Fisiología al mejor trabajo en el área Endocrinología. Otorgado por la Sociedad de Fisiología. Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y de la Sociedad Argentina de Fisiología 2008, Mar del Plata. La producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) derivadas de la hiperglicemia son mediadores de las complicaciones en el estado diabético. En el presente trabajo, analizamos los efectos de la diabetes y del tratamiento con insulina sobre la producción del radical hidroxilo (·OH), el estrés oxidativo y la vía mitocondrial de apoptosis en el hígado de rata. Ratas Wistar macho adultas fueron distribuidas en tres grupos: control (C) (buffer citrato de sodio, ip), diabéticas inducidas por estreptozotocina (DIE) (60mg/kg pc, inyección única ip) y diabéticas tratadas con insulina (DIE+I) (15 días post-inyección, ratas DIE recibieron insulina 3 veces al día, por 15 días, s.c.). Todos los animales fueron sacrificados en el día 30. La producción de ·OH fue medida como un indicador de la producción de ROS. Se evaluó la relación ácido 2,3-Dihidroxibenzoico/Ácido Salicílico (2,3-DHB/AS) determinada por HPLC equipado con detector electroquímico. También se determinó por HPLC la lipoperoxidación (como malondialdehído, MDA) y el porcentaje de glutation oxidado (%GSSG). Las proteínas involucradas en el proceso apoptótico fueron examinadas por Western Blot. Para evaluar apoptosis se realizaron análisis de TUNEL y de actividad caspasa-3. En DIE aumentaron significativamente versus C:·OH, MDA y %GSSG; igualmente se encontraron aumentadas Bcl-xLy Bax mitocondriales y citocromo c citosólico. La apoptosis fue confirmada por TUNEL y actividad caspasa-3. El tratamiento con insulina (DIE+I) disminuyó la producción de ·OH, MDA y %GSSG alcanzando los valores de C. También disminuyó el nivel de Bax sin afectar ni Bcl-xL ni citocromo c, evidenciándose una atenuación de la apoptosis comparada con DIE. Nuestros Resultados muestran que el estado diabético aumenta la producción hepática de ·OH y MDA conduciendo a la célula a apoptosis vía la ruta mitocondrial. Significativamente, la insulina mostró tanto efectos anti-oxidantes como anti-apoptóticos.