Caracterización de cepas de Escherichia coli verotoxigénico aisladas de alimentos cárnicos mediante MLVA (Multiple Loci VNTR Analysis)

FRANCI, T., SANSO A.M., BUSTAMANTE A.V., LUCCHESI P.M.A. & PARMA A.E.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Escherichia coli verotoxigénico (VTEC) representa un grupo muy importante de patógenos emergentes, causante de severas enfermedades en seres humanos. Si bien el serotipo O157:H7 es el más frecuentemente asociado a casos de síndrome urémico hemolítico en diferentes países, muchos otros serotipos están también asociados a enfermedades en humanos. La principal vía de contagio al hombre es la ingesta de alimentos contaminados. El análisis de múltiples loci VNTR- Variable Number of Tandem Repeats – (MLVA) se ha convertido en un método muy utilizado para la subtipificación de organismos patógenos como Escherichia coli O157:H7, entre otros. Los VNTRs constituyen excelentes marcadores moleculares cuya importancia a nivel epidemiológico permite la asociación entre muestras obtenidas de pacientes, con aislamientos provenientes de alimentos contaminados y reservorios. Con el objetivo de evaluar la diversidad genética de cepas VTEC aisladas en Argentina, a partir de alimentos cárnicos contaminados, se analizaron mediante MLVA 51 cepas pertenecientes a 13 serotipos no-O157:H7. Para ello se amplificaron por PCR 7 loci VNTR genéricos para Escherichia coli y Shigella. Los productos de la amplificación se analizaron mediante electroforesis en geles de poliacrilamida y se visualizaron por tinción con sales de plata. Los amplímeros de las distintas variantes alélicas encontradas se enviaron a secuenciar. Todas las muestras pudieron ser tipificadas por este ensayo de MLVA y revelaron 21 perfiles diferentes, 11 de ellos, únicos. El número de alelos detectado por locus varió entre 1 (CVN002, CVN007 y CVN015) y 11 (CVN014). El locus CVN003 presentó alelo nulo para todos los serotipos estudiados. El número de repeticiones identificadas entre los 7 loci analizados estuvo comprendido entre 1 y 18  y se registró un total de 21 alelos. El análisis de la diversidad intra-serotipo mostró índices notablemente diferentes de acuerdo al serotipo (DN= 0 - 0,67), siendo el más variable el O178:H19. Los resultados obtenidos muestran una importante diversidad genética entre los aislamientos VTEC provenientes de alimentos cárnicos. Sin embargo, también señalan la necesidad de encontrar más loci VNTR que permitan una mejor discriminación entre algunos aislamientos.