Detección del gen de la toxina subtilasa en cepas de Escherichia coli verotoxigénico

SUÁREZ, L. V., SANSO, A. M., LUCCHESI, P.

Tandil

Jornada; Jornadas Tercer encuentro de becarios Unesco-Proyecto piloto modelo de cooperación entre investigadores y profesores de Ciencias Naturales; 2008

Fac. Cs. Vet UNCPBA- UNESCO Montevideo

Escherichia coli verotoxigénico (VTEC) comprende un grupo muy diversificado con más de 200 serotipos. Estas bacterias pueden causar enfermedades en el ser humano, como diarrea acuosa, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico. Algunas poseen un plásmido de gran tamaño, por lo que se lo denomina megaplásmido, el cual puede portar genes codificantes de posibles factores de virulencia. Uno de ellos es la recientemente descubierta toxina subtilasa (SubAB), con efecto citotóxico sobre células Vero y letal para ratón, compuesta por una subunidad A y una subunidad B pentamérica. El objetivo de este trabajo fue implementar una metodología para detectarla y analizar su presencia en cepas VTEC nativas aisladas de bovinos, de diferente procedencia y serotipo. Para ello se puso a punto una PCR utilizando primers especificos de dominios funcionales del gen subA. Los productos de amplificación se visualizaron en geles de agarosa teñidos con bromuro de etidio. Estos primeros ensayos indicaron una buena eficiencia en la amplificación. Se compararon los datos obtenidos de subA con los de otros genes de virulencia previamente detectados en las cepas estudiadas. La mayoría de las cepas subA+ eran también ehxA+, a excepción de 2 de ellas. Al relacionar la presencia/ausencia de 3 genes generalmente localizados en el megaplásmido (subA, ehxA y saa), se encontraron 4 combinaciones de los mismos. Estos resultados confirman una vez más la gran diversidad genética de los megaplásmidos de VTEC