Dinámica mutacional de VNTRs en Escherichia coli O157:H7 aislado en Argentina.

BUSTAMANTE, A. V., SANSO, A. M., LUCCHESI, P. M. A. Y PARMA, A. E.

Pergamino

Congreso; 36° Congreso Argentino de Genética; 2007

Sociedad Argentina de Genética

El análisis de múltiples loci VNTR (MLVA- Multiple Locus VNTR Analysis) se ha convertido en una herramienta confiable capaz de establecer relaciones genéticas para la vigilancia epidemiológica y la subtipificación molecular de organismos patógenos como Escherichia coli O157:H7. Conocer la tasa de mutación los VNTRs (Variable Number Tandem Repeats) y los factores que la afectan es importante cuando se utiliza el MLVA para caracterizar aislamientos provenientes de un brote. Por tal motivo, el objetivo de este trabajo es conocer la tasa de mutación de 9 secuencias VNTRs específicas del serotipo O157:H7 amplificadas por PCR en poblaciones bacterianas generadas in vitro, a partir de aislamientos de E. coli verotoxigénico de Argentina. Los eventos de mutación se estudiaron en 100 linajes clonales independientes, generados a partir de una colonia única, mediante pasajes seriados y paralelos durante 10 días (~291.000 generaciones). Se tomaron muestras de ADN de la colonia inicial (T0) y de los 100 linajes, a los 5 (T5) y 10 días (T10). Los productos de amplificación se visualizaron en geles de poliacrilamida desnaturalizantes teñidos con sales de plata. En este primer ensayo realizado a partir de uno de los aislamientos se encontraron 8 mutaciones en uno de los 9 VNTRs analizados: 2 mutaciones resultaron de la pérdida de unidades de repetición (T10) y 6 fueron mutaciones puntuales (T5). La tasa de mutación obtenida en esta primera cepa nativa es similar a las halladas por otros autores en este serotipo y en otras bacterias patógenas.