Análisis de la dinámica mutacional de secuencias VNTR en Escherichia coli verotoxigénico O157:H7 aislado en Argentina.

SEGURA, D., BUSTAMANTE A.V., SANSO A.M., LUCCHESI P.M.A. & PARMA A.E.

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Escherichia coli verotoxigénico (VTEC) representa un importante grupo de patógenos emergentes que puede causar severas enfermedades en los seres humanos, tales como colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico. El bovino es el principal reservorio y los alimentos de origen animal, la principal fuente de infección en humanos. El análisis de múltiples loci VNTR -Variable Number Tandem Repeats-  (MLVA) es una herramienta con un alto poder de discriminación, capaz de establecer relaciones genéticas para la vigilancia epidemiológica y la subtipificación molecular de organismos patógenos como VTEC. Conocer la tasa de mutación de los VNTRs y los factores que la afectan es importante cuando se utiliza el MLVA para caracterizar aislamientos provenientes de un posible brote. El objetivo de este trabajo fue analizar la dinámica mutacional de 9 loci VNTR específicos del serotipo O157:H7, en poblaciones bacterianas generadas in vitro a partir de 5 aislamientos O157:H7. Los eventos de mutación se estudiaron mediante ensayos de pasajes seriados y paralelos (EPSP), durante 10 días. En cada uno de estos ensayos se generaron 100 linajes clonales independientes a partir de una colonia única, representativos de aproximadamente 23.500 generaciones. Se tomaron muestras de ADN de la colonia inicial (T0) y de los linajes, a los 5 (T5) y 10 días (T10). Los productos de PCR de los 9 loci se visualizaron en geles de poliacrilamida teñidos con sales de plata y los eventos mutacionales observados en los diferentes VNTRs se secuenciaron para determinar qué clase de mutación se había generado. Se calculó la frecuencia de alelos mutados y se estimaron las tasas de mutación. Los datos obtenidos mostraron que las mutaciones simples (inserción/deleción de una unidad de repetición) ocurren más frecuentemente que las mutaciones múltiples (de varias unidades de repetición) y se produce una mayor proporción de inserciones sobre las deleciones. Se observaron diferencias en la tasa de mutación de diferentes loci entre cepas. Del total de las mutaciones en las 5 cepas, el locus más mutable fue el O157-10 (68,75%), seguido por el TR4. Por otro lado, los loci Vhec2 y Vhec4 no registraron mutaciones en ninguno de los 5 ESPS. Las tasas de mutación obtenidas fueron similares a las halladas por otros autores en este serotipo y en otras bacterias patógenas. Dada la alta variabilidad del locus O157-10 y de acuerdo al objetivo del estudio,  la inclusión de dicho locus en el MLVA es discutible.