NANOPARTÍCULAS DE ORO CON 6-MERCAPTOPURINA PARA "DRUG DELIVERY": ENSAYOS DE CITOTOXICIDAD CON CÉLULAS A549

C. OTERO; M. A. HUERGO; R. CRESPO; C. VERICAT.

La Plata

Congreso; Nano 2018; 2018

Y-TEC (YPF Tecnología)

Las nanopartículas de oro (AuNPs) se están empleando cada vez más en aplicaciones biomédicas, tanto para diagnóstico y técnicas de imagen como para ciertas terapias, entre ellas para transporte y liberación controlada de fármacos y fototermia plasmónica [1]. Esto se debe en gran medida a sus propiedades ópticas singulares y al hecho de que son biocompatibles y estables en medios biológicos [2]. Además es posible sintetizar ?a medida? AuNPs de tamaños y formas muy diferentes y funcionalizarlas fácilmente mediante la química del tiol, lo que les confiere una gran versatilidad para las aplicaciones [3]. El desarrollo de nanomateriales ?inteligentes? se basa muchas veces en utilizar las propias características de los sistemas biológicos para dirigir tratamientos. Por ejemplo, es sabido que la concentración intracelular de glutatión (GSH), un antioxidante vital, es significativamente mayor que la extracelular, y que esta diferencia se encuentra particularmente incrementada en ciertos tumores. La estrategia consiste en este caso en llevar AuNPs funcionalizadas con especies unidas a través de un grupo tiol y favorecer la liberación controlada de esta especie por su intercambio con GSH, que se verá mucho más favorecido en el interior de las células tu morales.Una estrategia interesante para lograr la liberación controlada de una especie unida a una AuNP a través de un grupo tiol consiste en aprovechar el hecho de que la concentración intracelular de glutatión (GSH) es significativamente mayor que la extracelular y se encuentran valores particularmente elevados en ciertas células tumorales. Esta estrategia de intercambio de ligandos se ha empleado exitosamente para lograr la liberación de varios tioles de interés biológico [4] y aquí se propone para el caso de la 6-mercaptopurina (6MP), un tiol sintético empleado para el tratamiento de leucemias y enfermedades autoinmunes.En este trabajo se modificaron con el fármaco 6MP dos tipos de nanopartículas: (i) AuNPs esféricas de 15 nm de diámetro recubiertas con citrato y (ii) AuNPs triangulares (AuNTs) de aproximadamente 70 nm de lado y altura < 10 nm [5], lográndose dispersiones acuosas purificadas estables a pH = 7. En el caso de las AuNPs esféricas de 15 nm las dispersiones se pusieron en contacto con soluciones de GSH xx mM, pudiéndose observar mediante espectroscopía UV-vis el intercambio de ligandos luego de 48 hs.Para evaluar el potencial efecto citotóxico de ambos tipos de AuNPs cargadas con 6MP se empleó una la línea tumoral humana, la A549. Las células en cultivo se hicieron crecer en pocillos (3-5x103 células / pocillo) y se pusieron en contacto con las diferentes concentraciones de 6MP, con ambos tipos de AuNPs-6MP y con AuNPs sin 6MP. Se y se evaluó la viabilidad celular empleando el ensayo de reducción de tetrazolio o bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniletrazol (MTT). Ambos tipos de Las AuNPs sin 6MP no resultaron ser citotóxicas para concentraciones < 200 µM. Las AuNPs-6MP de 15 nm esféricas generaron mayor citotoxidad que la 6MP libre, en concentraciones equivalentes, para un tratamiento tratamientos de 24 hs, mientras que para tratamientos de 48 hs no hubo diferencias significativas entre células tratadas con el fármaco libre o unido a las AuNPs y la 6MP libre. Los AuNTs-6MP también muestran generaron un aumento en la inhibición de la viabilidad celular respecto a los AuNTs libres, aunque el porcentaje de inhibición fue menor.Referencias[1] Pelaz, B et al. (2017). ACS Nano. 11, 2313?2381. [2] Jain, P et al. (2008). Acc. Chem. Res. 41, 1578?1586. [3] Pensa E et al. (2012). Acc. Chem. Res. 45, 1183?1192. [4] Kim C et al. (2009). Nanoscale 1, 61-67.[5] Huergo, MA et al., enviado.