THE PHYSIOLOGICAL RELEVANCE OF MIDGUT MEMBRANE PROTEINS IN THE PROCESS OF LIPID TRANSFER IN A VECTOR OF CHAGAS’ DISEASE

FRUTTERO, L.L.; STARIOLO R; CARLINI, C.R.; RUBIOLO, E.R.; CANAVOSO, L.E.

San Juan- Argentina

Jornada; Segunda Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina; 2011

Sociedades de Biología de la República Argentina

La lipoforina, una lipoproteína de alta densidad, es el transportador lipídico más importante en la circulación de los insectos. En la mayoría de las situaciones fisiológicas, la lipoforina actúa como un “transportador reusable”, realizando ciclos de captación y transferencia de lípidos sin ser internalizada ni degradada por las células blanco. Aunque este evento resulta clave en la fisiología de los insectos, no se han identificado hasta el momento receptores no endocíticos para esta lipoproteína. Para lograr una mejor comprensión del metabolismo de lípidos en insectos hematófagos, en el presente trabajo se analizó la transferencia de lípidos entre la circulación y el tejido intestinal, caracterizando las proteínas de membrana con capacidad para interaccionar con lipoforina. En el estudio se utilizó como modelo a Panstrongylus megistus, un importante vector de la enfermedad de Chagas. La metodología incluyó inmunofluorescencia, ensayos con lipoforina conjugada con fluoróforos, ensayos de unión al ligando (“ligand blotting”), inmunoprecipitación, electroforesis bidimensional y espectrometría de masas en tándem. Mediante ensayos de inmunofluorescencia y experimentos in vivo con lipoforina marcada fue posible demostrar que la lipoproteína interacciona principalmente con la región sub-epitelial del tejido intestinal, no observándose señal intracelular en los enterocitos compatible con la endocitosis. Los estudios utilizando lipoforina conjugada con un análogo de ácidos grasos (Bodipy-FA) indicaron que la transferencia de lípidos entre la lipoforina y el tejido intestinal es bidireccional e independiente del estado nutricional del vector. Mediante “ligand blotting”, inmunoprecipitación y espectrometría de masas se identificaron varias proteínas de la membrana intestinal con capacidad para interaccionar con lipoforina, siendo la subunidad β del complejo ATP sintetasa (β-ATPasa) la de mayor relevancia. Esta proteína ha sido descripta como receptor de lipoproteínas en algunas líneas celulares de mamíferos. Analizados en conjunto, los resultados mostraron las propiedades a nivel celular de la interacción entre lipoforina y el tejido intestinal en este insecto hematófago, y sugieren por primera vez un potencial rol de la β-ATPasa como receptor no endocítico de la lipoforina en el tejido intestinal de P. megistus.