Evaluación de la interacción de preosteoblastos MC3T3-E1 sobre titanio implantable asistida por el uso combinado de microscopías de luz blanca reflejada y de epifluorescencia

GRAVINA AN; FAGALI NS; CAJIAO CHECCHIN, VC; FERNÁNDEZ LORENZO MA

La Falda

Congreso; 5 Congreso Argentino de Microscopía SAMIC 2018; 2018

Asociación Argentina de Microscopia

Las interacciones entre células y biomateriales han sido tradicionalmente examinadas en términos de funciones celulares (viabilidad, actividad metabólica, diferenciación), que luego se correlacionan con las propiedades del biomaterial. Sin embargo, el análisis de estas funciones no es suficiente para caracterizar la nueva generación de materiales bioactivos, cuyo estudio requiere un abordaje integral de los fenómenos de adhesión celular, supervivencia, morfología,migración y crecimiento. El microscopio invertido es una herramienta de uso frecuente para la observación de células vivas en cultivo, dado que permite obtener imágenes a través de soportes transparentes (placas de Petri, multi-well, portaobjetos, entre otros). Los estudios del comportamiento celular en microambientes más complejos, como es el caso de los biomaterialesmetálicos (opacos), reducen la aplicabilidad de la microscopía óptica convencional.El presente trabajo describe la aplicación de la técnica de microscopía óptica de epifluorescencia para revelar la distribución de marcadores visuales intracelulares que actúen como descriptores para la caracterización cuali- y cuantitativa de la interacción entre pre-osteoblastos MC3T3-E1 y sustratos de Titanio (Ti) c.p. grado 2 para su aplicación en implantes óseos.La observación microscópica utilizando luz blanca reflejada (Figura 1.a.) reveló los aspectos superficiales del metal (bordes de grano principalmente), pero no se evidenciaron las células adheridas a su superficie. En cambio,la tinción con DAPI permitió evaluar la densidad de células adheridas (352 células/mm2) y el aspecto de los núcleos (figura 1.b.). La tinción con faloidina, porsu parte, puso de manifiesto la morfología poligonal y aplanada típica de este tipo celular, y la distribución cuasi paralela de los filamentos de actina, sugiriendo una orientación preferencial del citoesqueleto de la célula en función de la superficie de contacto. También fue posible observar lapresencia de puntos de adhesión focal e interacción entre células (flechas rojas y blancas respectivamente, figura 1.c.). Ambas imágenes combinadas (figura 1.d.) permiten determinar la ubicación del núcleo en el centro de cada célula (flechas amarillas).En conclusión, la combinación de la microscopía por luz blanca reflejada y la de epifluorescencia permite establecer correlaciones entre las propiedades superficiales del material opaco (presencia de hoyuelos, mesetas, surcos, películas superficiales, productos de corrosión, etc.) y los cambios anivel biológico (distribución y morfología celular, direccionamiento de los filamentos de actina, frecuencia de puntos de adhesión focal e interacción entre células, etc.) lo que permitirá obtener un conocimiento más profundo de los fenómenos asociados a la interacción célula-biomaterial.Filiaciones:[1] Instituto de Investigaciones Fisicoquímicas Teóricas y Aplicadas (INIFTA), CONICET[2] Facultad de Ciencias Exactas, Universidad Nacional de La Plata[3] Facultad de ingeniería, Universidad Nacional de La Plata