Actividades enzimáticas de P. putida A ATCC12633 involucradas en la resistencia y degradación del tratradeciltrimetilamonio

LIFFOURRENA. A.S.; BOERIS, P.S.; LUCCHESI, G.I.

Jornada; I Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina; 2007

P. putida A ATCC 12633 responde al tetradeciltrimetilamonio (TDTMA) modificando el contenido de fosfolípidos específicos de su membrana, con aumento de fosfatidilglicerol y ácido fosfatídico (PA) y disminución de cardiolipina. En la degradación de TDTMA participa una actividad monooxigenasa, que produce trimetilamina (TMA) y tetradecanal. En este trabajo se estudiaron dos enzimas involucradas en la tolerancia y en la degradación del TDTMA por P. putida: fosfolipasa D (PLD) y monooxigenasa. PLD se determinó por su capacidad de transfosfatidilar 1-etanol luego de incubar las células con 32P-Pi y estimularlas con TDTMA durante 5 y 15 min. Respecto a células no tratadas, la actividad PLD detectada 5 min post-exposición a TDTMA aumentó el 72 %, mientras que a los 15 min, no se detectaron cambios. PLD participaría en originar el aumento en el contenido de PA que se detecta en células expuestas al detergente. La actividad monooxigenasa se determinó en extractos celulares obtenidos luego del crecimiento de P. putida con TDTMA como fuente de C y N. La enzima es de localización periplásmica, NAD(P)H dependiente e inhibida por TMA, efecto revertido por Al+3. Por EIF se determinó una banda con actividad monooxigenasa de Pi=7.3, la que en PAGE-SDS, se resolvió en 3 bandas. Por MALDI-TOF y PMF una proteína de PM= 60 kDa fue identificada como la chaperona GroEL, lo cual se correlaciona con el transporte y el plegamiento de la enzima al periplasma.