IDENTIFICACIÓN DE GENES QUE CODIFICAN PARA CARDIOLIPINA SINTASA EN P. putida A ATCC 12633

LOPÉZ G.A; HEREDIA R.M; BOERIS P.S.; LUCCHESI G.I.

Jornada; XIX Jornadas de la Sociedad de Biología de Córdoba; 2013

En condiciones de estrés, las bacterias responden modificando el contenido de cardiolipina (CL) de su membrana. La cardiolipina sintasa (Cls) cataliza la condensación de dos moléculas de fosfatidilglicerol (PG) para formar CL y glicerol. El objetivo de este trabajo fue identificar el/los genes de P. putida A ATCC 12633 involucrados en la síntesis de CL. A partir del genoma de P. putida A ATCC 12633 se clonaron y secuenciaron dos orf homólogos a los genes cls y cls2 descriptos en P. putida KT 2440 y se obtuvieron, por inserción y deleción, mutantes simples y dobles afectadas en dichos orfs. El contenido de CL en la cepa parental y en las mutantes simples P. putida GP01 (clsΔaacC1) y P. putida RH01 (cls2Δ::aph(3´)-IIa) fue similar (12 % del total de fosfolípidos). En la doble mutante, P. putida RH02 (clsΔaacC1, cls2Δ::aph(3´)-IIa), el contenido de CL representó sólo un 2,9% del total de fosfolípidos. La disminución en los niveles de CL en P. putida RH02, se compensó con un 120% de aumento en los niveles de PG, lo cual es consistente con la vía de biosíntesis de fosfolípidos. Sólo los extractos crudos de cultivos de células de la doble mutante, no contienen actividad Cls cuando la misma se determinó utilizando el sustrato fluorescente NBD-PG, lo que confirmó que en P. putida A ATCC 12633 dos genes son responsables de codificar para las Cls que utilizan PG como sustrato. Las cantidades trazas de CL detectadas en la doble mutante podrían ser atribuidas a la acción de una nueva Cls que utiliza fosfatidiletanolamina y PG como sustratos.