Potencial acción protectora del fitoestrógeno genisteína frente a la injuria vascular

SANDOVAL, M.; CEPEDA, S.; DORRONSORO, A.; RAUSCHEMBERGER, MB.; MASSHEIMER, V.

Salta

Congreso; IX Congreso FASEN; 2012

FASEN

Se sugiere que dietas ricas en fitoestrógenos (FE) tendrían un efecto protector a nivel cardiovascular y óseo en mujeres menopáusicas. Se ha propuesto a la Genisteína (Gen), principal isoflavona de la soja, como alternativa terapéutica para prevenir patologías asociadas al hipoestrogenismo postmenopáusico. La menopausia es un período en el cual el riesgo de enfermedades cardiovasculares (ECV) se incrementa. La aterosclerosis es un proceso inflamatorio crónico que involucra al sistema vascular, inmunológico y endocrinometabólico. En estadios avanzados la lesión ateromatosa puede calcificarse. Si bien la identidad de células responsables de la mineralización es tema de discusión, se considera que las células musculares lisas vasculares (CMLV) juegan un rol crucial. La calcificación vascular presenta dos estadios extremos, uno inicial caracterizado por la adhesión de monocitos en respuesta al estímulo inflamatorio, y uno tardío, que  involucra la transdiferenciación de  células vasculares a células de linaje osteogénico (tardío). Objetivo estudiar la acción vascular de Gen sobre los eventos celulares que conducen a la calcificación. Metodología y resultados: Se emplearon cultivos primarios de células endoteliales (CE) y CMLV obtenidos por explante de aorta de ratas Wistar hembras. Para evaluar la interacción monocito-endotelio vascular (estadío inicial) se realizaron ensayos de adhesión de monocitos a CE en cultivo, cuantificándose la adhesión por recuento celular empleando microscopía óptica. El agente proinflamatorio LPS (lipopolisacárido) aumentó significativamente la adhesión monocítica (21±3,1 vs 34±1,7 cel/cpo, C vs LPS, p<0.01). El tratamiento (24hs) de las CE con Gen (10nM) disminuyó en un 43% (p<0.01) la adhesión respecto al efecto del LPS. La adhesión monocítica depende de la inducción de proteínas de superficie en CE y en monocitos. Usando la técnica de RT-PCR observamos que, en CE, el FE disminuyó los niveles del ARNm de la molécula de adhesión ICAM-1, mientras que el LPS lo aumentó 2 veces/basal. Si Gen se agrega antes del LPS el efecto del LPS se suprime. La ICAM-1 media la unión del monocito vía integrinas leucocitarias. Empleando citometría de flujo evaluamos la expresión la aM integrina CD11b en monocitos de sangre periférica tratados con Gen (24hs) y/o LPS (21hs). El FE disminuyó la expresión de CD11b (55% s/c, p<0.01) mientras que el LPS la estimula en un 30%. En presencia de Gen, el efecto del LPS es anulado. Para el estadío tardío se estudió la transdiferenciación de las CMLV a fenotipo óseo (CMLV®OB) induciendo calcificación. Para ello, CMLV se cultivaron en presencia de Ca 4 mM,  b-Glicerolfosfato 5 mM durante 25 días. Se observó un marcado aumento en la actividad de fosfatasa alcalina (FAL, marcador de diferenciación osteoblástica) y en el contenido de calcio en las CMLV calcificadas vs nativas (430 ±35 vs 32 ±1.9 UI/mg prot; 70± 8.2 vs 20 ±1.9 mg/mg prot; FAL; calcio respectivamente), corroborándose así la desdiferenciación de CMLV. Cuando las CMLV calcificadas se trataron 24 hs con Gen 10 nM, se  detectó un significativo descenso de FAL vs control (291±32 vs 430±35 UI/mg prot, p<0.01). Similarmente observamos que Gen indujo una significativa disminución en el contenido de calcio en las CMLV®OB,  comparado a las células calcificadas controles (46 ± 5.6 vs 70 ± 8.2 mg/mg prot., respectivamente, p<0.01). Estos hallazgos fueron corroborados por la tinción de los depósitos de Ca con rojo de alizarina. Conclusión: los resultados presentados sugieren una potencial acción protectora de Gen a nivel vascular, actuando a dos niveles de la lesión, disminuyendo la adhesión de monocitos al endotelio, y atenuando la desdiferenciación CMLV.