Los fitoestrógenos regulan el crecimiento, la adhesión celular y la apoptosis de células endoteliales

SANDOVAL, M.; CUTINI, P.; RAUSCHEMBERGER, M.B.; MASSHEIMER, V.

Circulo de Oficiales de Mar, Buenos Aires

Congreso; XXVI Reunión Anual de Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral (AAOMM); 2009

AAOMM

Los fitoestrógenos (FE) son compuestos naturales propuestos para minimizar los síntomas postmenopáusicos. Evidencias epidemiológicas muestran que dietas ricas en FE previenen la pérdida de masa ósea en mujeres menopausicas. En nuestro laboratorio investigamos los efectos vasculares de estos compuestos. La regulación de la proliferación, migración, adhesión celular y apoptosis es vital para la homeostasis vascular. Disminución de la proliferación endotelial, pérdida de endotelio por aceleración de apoptosis y  aumento en la adhesión leucocitaria favorece la lesión vascular y constituyen eventos desencadenantes de la principal patología vascular la aterosclerosis.  Previamente hemos reportado que el FE genisteína (Gen) estimula la síntesis de óxido nítrico (NO) e inhibe la agregación plaquetaria dependiente de endotelio. El objetivo del presente trabajo fue investigar el efecto de Gen sobre la proliferación, adhesión y apoptosis de células endoteliales (CE). Se utilizaron cultivos primarios de CE obtenidos a partir de aorta toráxica murina. Observamos que la proliferación celular (medida por incorporación de timidina radiomarcada) se estimula significativamente luego de 24 hs de tratamiento con Gen 10nM (70.52 ±6.77 vs. 41.24 ±4.49 cpm103 /mg prot, Gen vs. Control). Este efecto regulatorio sobre el crecimiento celular se manifiesta en un amplio rango de concentraciones (0.01 -10nM). La acción mitogénica fue suprimida por el antagonista del receptor de estradiol (ICI182780) sugiriendo la participación del mismo en el mecanismo de acción. El estimulo de Gen sobre la síntesis de ADN depende de NO, ya que la preincubación de las CE con L-NAME (inhibidor de óxido nítrico sintasa) bloqueó la acción del FE (71 vs 2% s/control, Gen vs. Gen + L-NAME). Para evaluar el efecto del FE sobre la interacción leucocito-endotelio, se midió el efecto de la Gen sobre la adhesión de monocitos a monocapas de CE. Se aislaron monocitos (gradiente de Ficoll) a partir de sangre periférica, se adicionaron a CE en cultivo y se cuantificó por recuento celular. Se empleó como control positivo de adhesión, el agente proinflamatorio LPS (lipopolisacarido bacteriano). El LPS estimuló significativamente la adhesión leucocitaria y la Gen la inhibió comparado con el grupo control (267±36; 417±21.5; 160 ±9.8 cel/μl, control, LPS, Gen respectivamente, p<0.01). Si Gen se adiciona 24hs antes que el LPS, se bloquea la adhesión inducida por el proinflamatorio (417±21.5 vs. 237 ±17.8 cel/μl, LPS vs. Gen+LPS). La adhesión monocitica depende de la presencia de moléculas de adhesión celular (CAMs) en la superficie endotelial. Empleando la técnica de RT-PCR se midieron los niveles del ARNm de las moléculas de adhesión VCAM-1; P-selectina y E-selectina. Las CE se trataron 24 hs con Gen (10nM) ó LPS (1μg/ml). Se observó que los niveles de expresión del ARNm para las tres CAMs fueron significativamente menores en el grupo tratado con Gen respecto a los grupos control y LPS, sugiriendo que la menor adhesión monocítica inducida por Gen podría deberse a un efecto del FE sobre la expresión del ARNm. Para evaluar el efecto del FE sobre la apoptosis de CE, empleamos la técnica de fragmentación de ADN. Como inductor de apoptosis se seleccionó peróxido de hidrógeno (H2O2). Tratamientos de 6 hs con H2O2 200 µM indujeron una máxima fragmentación. Si previo al agregado de  H2O2 las células se tratan 24 hs con Gen se inhibe parcialmente la fragmentación de ADN inducida por el H2O2. En resumen, los resultados presentados muestran que Genisteína estimula la proliferación y reduce la adhesión monocítica y la apoptosis celular inducida por agentes proinflamatorios, sugiriendo una potencial acción beneficiosa del FE a nivel vascular.