Rol de los esteroides ovaricos progesterona y estrona sobre alteraciones vasculares inducidas en procesos inflamatorios

CUTINI, P.; RAUSCHEMBERGER, M.B.; MASSHEIMER, V.

Mar del Plata, Pcia. Buenos Aires

Congreso; 54 Reunion Anual de SAIC; 2009

SAIC

La inducci¨®n de mol¨¦culas de adhesi¨®n en c¨¦lulas endoteliales (CE), estimulaci¨®n de la apoptosis y migraci¨®n de c¨¦lulas musculares lisas vasculares (CMLV), son respuestas del lecho vascular en situaciones de estr¨¦s oxidativo o inflamaci¨®n. Estos eventos son regulados por numerosos factores y hormonas, entre ellas los esteroides sexuales. El objetivo fue investigar el efecto de progesterona (Pg) y estrona (E1) sobre los procesos celulares mencionados en cultivos primarios de CE y CMLV murinos. Se estudi¨® el efecto de Pg y E1 sobre apoptosis midiendo fragmentaci¨®n de ADN (geles de agarosa o marcaci¨®n con [3H]-timidina). El tratamiento con Pg 10nM indujo una mayor fragmentaci¨®n respecto al control (55%, 88% ADN fragmentado/total; Control, Pg; p<0.05), mientras que no se observaron cambios con E1 10nM. El inductor de apoptosis H2O2 (1mM) produjo la m¨¢xima fragmentaci¨®n. Si las c¨¦lulas se tratan con E1 previo al agregado del H2O2, este efecto se revierte parcialmente (92%, 45% ADN fragmentado/total; H2O2, E1+H2O2; p<0.05). El tratamiento con Pg no modifica la acci¨®n del H2O2. Empleando la t¨¦cnica de RT-PCR se evalu¨® el efecto de E1 y Pg sobre los niveles de ARNm de las mol¨¦culas de adhesi¨®n VCAM-1, P-selectina y Eselectina en CE. Como control de expresi¨®n se us¨® GAPDH. Las CE se trataron 24 h con el agente proinflamatorio LPS (lipopolisac¨¢rido bacteriano), E1 o Pg. El LPS (1 ¦Ìg/ml) elev¨® los niveles de ARNm de las mol¨¦culas estudiadas (3 veces/basal), mientras que el tratamiento con E1 y Pg no exhibe cambios respecto al control. En presencia de las hormonas se suprime el efecto del LPS. Realizamos ensayos de migraci¨®n para estudiar si las hormonas afectan la movilidad de CMLV. Tratamientos con Pg o E1 estimularon significativamente la migraci¨®n (105¡À9; 264¡À22; 240¡À18 c¨¦lulas/campo, C; E1; Pg, p<0.001). Estos Resultados muestran una acci¨®n diferencial y selectiva de E1 y Pg sobre los procesos de apoptosis, migraci¨®n celular e inducci¨®n de mol¨¦culas de adhesi¨®n en tejido vascular.2O2 (1mM) produjo la m¨¢xima fragmentaci¨®n. Si las c¨¦lulas se tratan con E1 previo al agregado del H2O2, este efecto se revierte parcialmente (92%, 45% ADN fragmentado/total; H2O2, E1+H2O2; p<0.05). El tratamiento con Pg no modifica la acci¨®n del H2O2. Empleando la t¨¦cnica de RT-PCR se evalu¨® el efecto de E1 y Pg sobre los niveles de ARNm de las mol¨¦culas de adhesi¨®n VCAM-1, P-selectina y Eselectina en CE. Como control de expresi¨®n se us¨® GAPDH. Las CE se trataron 24 h con el agente proinflamatorio LPS (lipopolisac¨¢rido bacteriano), E1 o Pg. El LPS (1 ¦Ìg/ml) elev¨® los niveles de ARNm de las mol¨¦culas estudiadas (3 veces/basal), mientras que el tratamiento con E1 y Pg no exhibe cambios respecto al control. En presencia de las hormonas se suprime el efecto del LPS. Realizamos ensayos de migraci¨®n para estudiar si las hormonas afectan la movilidad de CMLV. Tratamientos con Pg o E1 estimularon significativamente la migraci¨®n (105¡À9; 264¡À22; 240¡À18 c¨¦lulas/campo, C; E1; Pg, p<0.001). Estos Resultados muestran una acci¨®n diferencial y selectiva de E1 y Pg sobre los procesos de apoptosis, migraci¨®n celular e inducci¨®n de mol¨¦culas de adhesi¨®n en tejido vascular.