Eje ¨®seo-vascular: regulaci¨®n de la vascularizaci¨®n por f¨¢rmacos antirresortivos.

CUTINI, P.; RAUSCHEMBERGER, M.B.; MASSHEIMER, V.

Buenos Aires

Congreso; XXXI Reunion Anual AAOMM; 2014

AAOMM

La vascularizaci¨®n ¨®sea es indispensable en todas las etapas de la vida del hueso: formaci¨®n, modelaci¨®n, remodelaci¨®n y consolidaci¨®n de fracturas. La angiog¨¦nesis es el proceso de formaci¨®n de nuevos vasos sangu¨ªneos a partir de la vasculatura pre-existente. Comprende los eventos de migraci¨®n y proliferaci¨®n de c¨¦lulas endoteliales (CEs), con posterior formaci¨®n y organizaci¨®n de otros grupos celulares en estructuras tubulares para finalmente madurar en vasos sangu¨ªneos estables. El factor de crecimiento de endotelio vascular (VEGF) es el regulador principal de la angiog¨¦nesis que responde a varios est¨ªmulos tales como hipoxia/isquemia, estr¨®genos y ¨®xido n¨ªtrico (NO). A nivel ¨®seo promueve el flujo canalicular, la mineralizaci¨®n del cart¨ªlago, y el aporte de c¨¦lulas progenitoras de medula ¨®sea. El objetivo de este trabajo fue investigar los efectos de f¨¢rmacos empleados en la patolog¨ªa ¨®sea sobre eventos moleculares y celulares involucrados en la neovascularizaci¨®n: s¨ªntesis de VEGF, producci¨®n de NO, proliferaci¨®n y migraci¨®n de CEs. Para tal fin seleccionamos el bisfosfonato Alendronato (ALN) y el modulador selectivo del receptor de estr¨®genos (SERM) Raloxifeno (Rx). Como sistema experimental se emplearon cultivos primarios de CEs obtenidos a partir de anillos de aortas de ratas Wistar, tratados in vitro con Rx o ALN. Primeramente se evalu¨® la producci¨®n de VEGF en CEs. Empleando una t¨¦cnica de inmunoensayo (ELISA), determinamos la producci¨®n de VEGF en sobrenadantes de cultivos de CEs. Demostramos que 24 hs de tratamiento con ALN 5 ¦ÌM o Rx 10 nM indujo un marcado est¨ªmulo sobre la s¨ªntesis del factor de crecimiento, siendo mayor el incremento cundo las c¨¦lulas recibieron tratamiento con el bisfosfonato (21.03¡À0.58; 33.26¡À1.62; 27.32¡À0.12 pg VEGF/mg prote¨ªna, control; ALN 5 ¦ÌM; Rx 10 nM respectivamente, p<0.05). Teniendo en cuenta que las acciones del Rx son mediadas por el receptor de estr¨®genos (RE), empleando la t¨¦cnica de RT-PCR estudiamos la acci¨®n de un activador natural del RE, el estr¨®geno estrona, sobre la s¨ªntesis del ARNm de VEGF. Dos horas de tratamiento de las c¨¦lulas con el estr¨®geno (10 nM) estimul¨® 2 veces con respecto al control la expresi¨®n del ARNm del factor de crecimiento (p<0.05). El estudio de los efectos del ALN y Rx sobre la producci¨®n de NO endotelial, regulador de la s¨ªntesis de VEGF, se realiz¨® empleando el m¨¦todo colorim¨¦trico de Griess. Observamos que ambos f¨¢rmacos indujeron un est¨ªmulo significativo sobre la s¨ªntesis del vasoactivo con respecto a la condici¨®n control (31.3¡À2.9; 52.3¡À4.6; 51.2¡À3.9 nmol de NO/mg prote¨ªna, control; Rx 10 nM; ALN 5 ¦ÌM, p<0.05). Para evaluar la acci¨®n de los agentes antirresortivos sobre la proliferaci¨®n, se emple¨® el ensayo colorim¨¦trico de reducci¨®n de la sal de tetrazolio MTT. Luego de 24 hs de tratamiento de las CEs con el SERM Rx observamos un acentuado est¨ªmulo del crecimiento celular (75 y 94% con respecto al control, Rx 1 y 10 nM respectivamente, p<0.001). Similares resultados se obtuvieron en tratamientos con Rx a tiempos m¨¢s prolongados (72 y 96 hs). La migraci¨®n de CEs se estudi¨® mediante la t¨¦cnica ¡°wound healing¡±. El tratamiento durante 72 hs con Rx 10 nM indujo un est¨ªmulo significativo sobre la migraci¨®n celular (304¡À29 vs 370¡À25 c¨¦lulas/campo; control vs Rx 10 nM; p<0.05). En cambio, el tratamiento con el bifosfonato no modific¨® la proliferaci¨®n y migraci¨®n de las CEs. En base a estos resultados concluimos que, los f¨¢rmacos anticatab¨®licos Rx y ALN ejercen efectos potencialmente favorables sobre la formaci¨®n de nuevos vasos sangu¨ªneos, aunque en forma diferencial. En las condiciones ensayadas, el SERM modula tanto los eventos celulares como moleculares, mientras que el bifosfonato solo lo har¨ªa a nivel molecular.