Fosforilación proteica en respuesta a efectos rápidos mediados por estrona en tejido aórtico de rata

RAUSCHEMBERGER, M. B.; SELLÉS, J.; MASSHEIMER, V.

Hotel Intersur (13 de Julio), Mar del Plata, Pcia. de Buenos Aires, 29 de Noviembre al 2 de Diciembre de 2005

Congreso; 50 Reunión Anual de SAIC; 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

  En este trabajo investigamos la participación de distintas vías mensajeras en la transducción de la señal mediada por estrona (E1), en aorta de rata. Hemos demostrado previamente que en forma semejante al estradiol,  la E1 estimula la síntesis de vasodilatadores (óxido nítrico y prostaciclina) pero su mecanismo de acción es ligeramente diferente ya que la activación de NOS es independiente de calcio. Usando ensayos de fosforilación de sustratos (histona III-S y mielina básica) se midió la actividad PKC y MAPK en homogenados totales obtenidos de aorta de rata, tratados “in vitro” con concentraciones fisiológicas de E1. La hormona estimula muy marcadamente la actividad PKC, a todas las dosis ensayadas (0.1-50 nM), siendo mayor el estímulo a dosis mayores (937% y 103%; s/c; E1 50 y 1 nM, p<0.001). Se realizaron estudios tiempo respuesta (1-10 min.), obteniéndose el máximo estímulo luego de 3 min. de tratamiento con E110 nM (0.42 ± 0.01 vs 0.20 ± 0.04 pmol Pi/mg prot/min., E1 vs C). Se comprobó la especificidad del ensayo, usando TPA como activador directo de PKC. Tratamientos de 5 min., 100 nM TPA, estimulan significativamente la actividad PKC (425% s/c, p<0.001).  Se demostró también que la E1 estimula la actividad MAPK a tiempos muy cortos de tratamiento. Luego de 30 segundos de exposición a E1 10 nM, la fosforilación de la proteína básica de mielina se incrementa en un estímulo de 341% sobre el control (p< 0.02).  Se estudio la contribución de fosfatasas en el mecanismo de acción hormonal cuantificando la producción de NO en presencia del inhibidor de fosfatasas PP-1 y PP2A, Calyculin A (10nM), observándose que la acción estimulatoria de E1 sobre la actividad NOS se potencia significativamente (121% vs 73% s/c; E1 + Calyculin A vs E1, p<0.01). Los resultados presentados aportan evidencias que, en tejido vascular, la acción no genómica de E1 comprende la fosforilación proteica y la estimulación de la síntesis de NO.