DETERMINACIÓN DE PARÁMETROS FUNCIONALES EN ESPERMATOZOIDES DE ANFIBIO

RODA CF; GRAMAJO BÜHLER MC; RAMOS I; IRUZUBIETA VILLAGRA AL

varias provincias

Encuentro; IV Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina; 2020

Los anfibios, al tener una vida bifásica (agua-tierra), son excelentes bioindicadores de la calidad ambiental, principalmente de los ambientes acuáticos donde se produce el desarrollo larval y medio al que retornan, cuando son adultos, para reproducirse. El aumento demográfico en el Noroeste Argentino amenaza el desarrollo de especies anfibias autóctonas como Leptodactylus chaquensis. Por esta razón, buscamos nuevos parámetros en la determinación de la calidad espermática que puedan ser aplicados en técnicas de fecundación in vitro, contempladas en programas de conservación de especies. En estudios previos determinamos parámetros fisio-morfológicos que pueden ser usados como estándares de calidad. Sin embargo consideramos importante el estudio de parámetros fisiológicos, hasta ahora no reportados para esta especie. El objetivo de este trabajo fue evaluar la integridad funcional de la membrana plasmática y determinar la presencia y actividad hialuronidasa en espermatozoides de L. chaquensis. Muestras de espermatozoides de animales capturados en el periodo reproductor (noviembre-febrero), obtenidas por dilaceración testicular, fueron seleccionadas y fraccionadas en Ringer Madre (RM). Para los ensayos citológicos se utilizaron las muestras con porcentaje de vitalidad mayor al 80%. Suspensiones espermáticas fueron expuestas a una solución hipoosmótica con diferentes osmolalidades (9,4; 18,8; 37,5; 75; 150 mOs) incubadas a 25±3°C durante 5 minutos. Como controles se utilizó RM y agua destilada. El hinchamiento de la membrana plasmática, visible como una gota en la pieza final del flagelo, indica respuesta positiva. Para testear la actividad hialuronidasa se incubaron distintos extractos espermáticos (3, 5, 10, 20.106 esp/mL) en placas de agar (0,03; 0,05; 0,10% de agar) a 25±3°C durante 24 y 48hs. Como controles se utilizó hialuronidasa 1X y RM. La formación de un halo de hidrólisis alrededor del pocillo donde se deposita la muestra, indica respuesta positiva. Se analizó el status acrosomal para correlacionar las muestras con parámetros morfológicos de normalidad, previamente establecidos. Espermatozoides en medios hipoosmóticos 9,4 mOs muestran una máxima respuesta positiva (86,33%±2,03). Los ensayos realizados con distintas concentraciones extractos espermáticos, no mostraron resultados positivos en ninguna concentración testeada de agar. Todas las muestras empleadas exhibieron 92,67%±0,49 de acrosoma intacto. Estos datos muestran que: -Los gametos obtenidos por dilaceración testicular mantienen altos porcentajes de funcionalidad e integridad de la membrana plasmática. -Una aparente ausencia de hialuronidasa. Sin embargo se requiere de otra metodología para evaluar la funcionalidad acrosomal de esta especie. Estos datos preliminares contribuirían al establecimiento de estándares de calidad espermática en anuros.