Fosfoipasa A2 en la reacción acrosómica de espermatozoides de Chinchilla lanigera

GRAMAJO BÜHLER MC; L. ZELARAYÁN; SANCHEZ TORANZO G.

Horco Molle

Jornada; XXX Jornadas Científicas; 2013

ASOCIACIÓN DE BIOLOGÍA DE TUCUMÁN

En mamíferos, los espermatozoides deben tener la capacidad de sufrir la exocitosis de su acrosoma (RA), para poder fusionarse con la membrana plasmática del ovocito y asegurar una fertilización exitosa. En este proceso se ha descripto la participación de fosfolipasas espermáticas y entre ellas la PLA2. Esta enzima es capaz de hidrolizar fosfolípidos de membrana en Lyso-fosfatidilcolina y ácido araquidónico (AA) activando una cascada de transducción de señales que culminan con la RA. OBJETIVO: Estudiar la participación de la PLA2 en la reacción acrosómica inducida in vitro con progesterona en espermatozoides epididimarios de Chinchilla lanigera. Los animales de experimentación fueron seleccionados por su edad (10-12 meses) y masa corporal (700g promedio), mantenidos con ciclos de luz-oscuridad de 12h con comida y agua ad libitum. Las muestras fueron tomadas por punción de la región caudal del epidídimo y lavadas por centrifugación con buffer fosfato salino (PBS). Se capacitaron por incubación en Fluido Tubárico Humano modificado, durante 2:30h en estufa gaseada a 37°C. Las suspensiones fueron tratadas con: I) Diferentes concentraciones de AA durante 15mim. II) Distintas concentraciones de Quinacrina (5-40µM) y Ácido aristocólico-ATA (40-320µM), inhibidores de PLA2, durante 15 y 5 min, respectivamente y se indujo la RA con 20µM de progesterona incubando por 50min más. Todas las reacciones fueron paradas con la adición de formaldehido a una concentración final de 4%. Se realizaron extendidos por duplicado y se evaluó el status acrosomal con tinción Coomassie Blue. RESULTADOS: I) La adición de AA exógeno induce la RA en forma dosis-dependiente, alcanzando una respuesta máxima con 50µM (35%). II) Con ambos inhibidores se obtuvo una disminución en los porcentajes de RA inducida por progesterona. Sin embargo el efecto inhibitorio de la Quinacrina fue mayor comparado con el ATA, registrándose una inhibición del 31,5% y 27% respectivamente. CONCLUSIÓN: La RA obtenida con AA exógeno, es un claro indicio de la participación de la PLA2 en este proceso. Sin embargo los bajos porcentajes de inhibición sugieren la participación de otras vías de señalización involucradas en la RA de espermatozoides de Chinchilla lanigera.