CALCIO/CALMODULINA KINASA II Y SU PARTICIPACIÓN EN LA CAPACITACIÓN DE ESPERMATOZOIDES DE Chinchilla lanigera

APARICIO JD; GRAMAJO BÜHLER MC; M.I BUHLER

Horco Molle

Jornada; XXIX Jornadas Científicas; 2012

ASOCIACIÓN DE BIOLOGÍA DE TUCUMÁN

La Chinchilla lanígera existe casi exclusivamente en criaderos comerciales. Sin embargo, la tasa reproductiva de la especie en cautiverio es baja. Por ello el estudio de su biología reproductiva es importante para el desarrollo de programas de conservación y técnicas de reproducción asistida. Los espermatozoides adquieren la capacidad fecundante mediante el proceso de capacitación (CP) durante el cual sufren cambios morfobioquímicos. La CP cambia el patrón de movilidad espermática, permite la reacción acrosómica (RA) y selecciona una subpoblación de gametos aptos para fertilizar al óvulo. Un factor importante en la CP es el aumento de [Ca2+]i que activa distintas vías de señalización celular. Se ha demostrado en algunas especies que la vía calcio/calmodulina (Ca/CaM) y la proteína quinasa dependiente de Ca/CaM (CaMKII) tiene un rol principal en la fusión de membranas. El Objetivo es determinar el rol de la vía Calcio/Calmodulina-CaMKII en los eventos de membrana que ocurren durante la CP in vitro de espermatozoides epididimarios. Los espermatozoides se obtuvieron por punción de la cola del epidídimo de animales sexualmente maduros. Las muestras fueron lavadas por centrifugación. La suspensión se dividió en seis fracciones. Cuatro de ellas se preincubaron con KN93, inhibidor de la CaMKII, en diferentes concentraciones durante 30 min. Luego se incubaron en medio capacitante Tyrode durante 4 hs. Las otras dos fracciones se utilizaron como control de KN-93 y control de muestra en fresco. La capacitación se evaluó induciendo la RA con progesterona 20 µM y se evidenció con tinción Papanicolaou para espermatozoides. Los resultados indican que el agregado de KN93 produce una inhibición de la RA de manera dosis dependiente. Observándose con la menor dosis testeada (5 µM) un 44% de RA en comparación al control (75%). Este efecto se mantiene sin diferencias significativas a mayores concentraciones (10, 20 y 40 µM). El análisis de viabilidad no arrojó resultados citotóxicos en las dosis empleadas. El bloqueo de la CaMKII posee un efecto inhibitorio de la CP espermática, sugiriendo que esta enzima desempeña un rol regulatorio en los eventos implicados en la adquisición de la capacidad fecundante.