Los lípidos del aceite de cáscara de mandarina inhiben la proliferación de células tumorales A549 in vitro e in vivo

CASTRO MA; PETERSON G; MASSONE A; RODENAK KLADNIEW B; MONTERO VILLEGAS S; POLO M; GARCÍA DE BRAVO M; CRESPO R

La Plata

Jornada; Primeras Jornadas Conjuntas de Educación Médica, Extensión e Investigación 2016; 2016

Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de La Plata

IntroducciónDe acuerdo con la Organización Mundial de la Salud la incidencia y la mortalidad producida por distintostipos de cáncer está aumentando de manera alarmante en las últimas décadas. Particularmente, el cáncerde pulmón causó 1.37 millones de muertes por año en todo el mundo y el subtipo no microcítico representamás del 80% de los cáncer de pulmón recientemente diagnosticados en pacientes en un estadío de laenfermedad avanzado y no resecable. La búsqueda de compuestos naturales como agentes terapéuticosefectivos, así como el interés social por la conservación del medio ambiente están impulsando a lautilización de residuos agroindustriales, entre ellos la cáscara de cítricos, como materia prima de bajo costopara la obtención de compuestos químicos de aplicación tanto sanitaria como industrial. A nivel mundial laproducción de cítricos ejerce un gran impacto en el comercio internacional así como en el ingresoeconómico de varios países, incluido Argentina. De la cáscara de los mismos se obtienen los aceitesesenciales, que poseen un amplio espectro de propiedades biológicas (antimicrobiana, antioxidante,antiinflamatoria, etc). El limoneno, el componente mayoritario de los aceites esenciales de naranja, limón,mandarina, lima y pomelo, tiene una actividad quimiopreventiva bien establecida contra varios tipos decáncer. Por otro lado, los cítricos son una fuente compleja de carotenoides (pigmentos naturalesliposolubles), que también se acumulan principalmente en la cáscara, y varios de ellos han demostradotener actividad anti-cancerígena.ObjetivosEvaluar la composición lipídica del aceite de cáscara de mandarina (AM) y estudiar su efectoantiproliferativo y antitumoral utilizando células tumorales provenientes de un adenocarcinoma pulmonar(A549), tanto in vitro (cultivos celulares) como in vivo (células implantadas en ratones nude).Materiales y métodosLa composición lipídica del AM obtenido por prensado en frío se analizó mediante TLC, cromatografíagaseosa (GC) y GC acoplada a espectrometría de masas (GC-MS).Para los ensayos in vitro, se cultivaron células A549 que fueron tratadas con dosis crecientes de AM. Laviabilidad y la proliferación celular se evaluaron mediante el test de MTT, la progresión del ciclo celular fueanalizada mediante citometría de flujo y la apoptosis fue determinada por el método de TUNEL.Para los ensayos in vivo, se implantaron subcutáneamente células A549 en ratones nude y los tratamientos3se iniciaron cuando los tumores alcanzaron un volumen aproximado de 300 mm . Los ratones sealimentaron con una dieta control o experimental (2.1 ó 6.3 µl AM/ratón/día) durante 21 días. El tamaño deltumor y el peso del animal fueron registrados dos veces por semana. Finalizado el tratamiento los ratonesfueron sacrificados y se colectaron muestras de tumor, hígado, tejido adiposo, riñón, bazo, intestinodelgado y sangre para análisis bioquímicos, histológicos e inmunohistoquímicos (niveles de albúmina yactividad de transaminasas séricas, TUNEL, PCNA)ResultadosSe determinó que el AM contiene compuestos volátiles y no volátiles. Más del 90% de la fracción volátilcorresponde al limoneno. En la fracción no volátil se encuentran: triglicéridos, carotenoides (libres yesterificados) y fosfolípidos. Los principales ácidos grasos de estos componentes no volátiles fueron:palmítico (16:0), esteárico (18:0), oleico (18:1 n9) y linoleico (18:2 n6).Los ensayos in vitro demostraron que a una concentración de 116 µl/L, el AM inhibe el 50% de laproliferación celular con un arresto del ciclo en la fase G /G . Los ensayos in vivo demostraron una 0 1reducción significativa en el crecimiento tumoral (49%) cuando se le administró a los animales una dosis de6.3 µl AM/ratón/día en el alimento. El AM incrementó la apoptosis en células tumorales tanto in vitro (9-30%)como in vivo (0.5-1.7%). No se observaron cambios significativos en la ingesta de alimento, peso corporal,peso e histología de órganos ni en parámetros bioquímicos séricos de toxicidad hepática en ratonestratados con el AM.ConclusionesEn base a estos resultados se demostró que el AM posee un efecto antiproliferativo en células tumoraleshumanas, sin efecto tóxico en ratones, por lo que podemos concluir que el AM tiene un gran potencial comoagente quimiopreventivo y/o quimioterapéutico.