Estrategia de desarrollo de una biblioteca de anticuerpos de dominio único de llama (VHH) para la identificación de marcadores de melanoma metastásico humano.

LACREU M, MAC KEON S, MORDOH J, URRUTIA M

Mar del Plata

Congreso; LV SAIC; 2011

SAIC

Una vez que el melanoma metastatiza a distancia, el pronósticoes sombrío. Aún no se han desarrollado Ac monoclonalescontra melanoma. Las llamas poseen, además de lasIgs convencionales, Acs que carecen de cadena liviana, cuyositio de combinación al Ag consta sólo de la región variable dela cadena pesada (VHH), poseyendo una estrategia de uniónal Ag diferente a la de los Acs convencionales. Con el fin deconstruir una biblioteca de VHHs contra Ag de superficie decélulas de melanoma humano, se inmunizaron llamas con líneasde melanoma humano metastático (LMHM). Mediante RT-PCRpara el transportador de membrana ABCB5, se obtuvieron 3LMHM positivas (de 9 estudiadas) cuyos extractos de membranafueron usados como inmunógenos. Luego de la inmunización seobservó que las respuestas séricas contra células enteras nopermeabilizadas aumentaba a medida que avanzaba la inmunización(1er, 2da y 3er inmunización) obteniéndose un titulo finalmayor a 1􀀑1000. Se aislaron células mononucleares de sangreperiférica, y mediante RT-PCR con primers específicos se amplificóel pool de VHHs para construir la biblioteca. También endos de las 3 líneas utilizadas se estudió mediante citometría deflujo la presencia en membrana plasmática de los marcadoresCD63 (tetraspanina) que será utilizada para la selección y de losmarcadores de células stem CD133 (prominina) y CD271 (nervegrow factor receptor). Las 2 LMHM fueron positivas para CD63(89%, 79%) y CD271 (96%, 98%) y negativas para CD133 (4%,3%). CD271 confirmó ser Ag de membrana mediante epifluorescencia.Los resultados mencionados nos permiten concluir quelas llamas han desarrollado respuesta contra Ag de membrana,probablemente en forma nativa. Por otro lado, la presencia enmembrana plasmática de CD271 en dos LMHM utilizadas comoinmunógeno, abre la posibilidad de obtener moléculas terapéuticasdirigidas contra este Ag.