Rápido y sencillo método de aislamiento de ADN de huevos de Trichuris.

MITTON G.A.; PETRIGH R.S.; FUGASSA M.H.

Congreso; VI Congreso Argentino de Parasitología; 2012

Las técnicas moleculares son de gran utilidad para el diagnóstico específico de helmintos gastrointestinales recuperados de necropsias, como de sus los huevos hallados en heces. El estudio molecular es especialmente útil en muestras ambientales, donde los restos parasitarios están en baja densidad o con una morfología poco específica. Sin embargo, la extracción de ADN en materia fecal presenta dificultades como la presencia de inhibidores y una baja proporción de ADN blanco. El objetivo de este trabajo consiste en seleccionar y optimizar un método de digestión y purificación de ADN de huevos de nematodes enteroparásitos presentes en materia fecal. Se aislaron de 100 a 1 huevos, en un estadío temprano de desarrollo, de hembras de Toxocara cati y Trichuris pampeana. Se probó una digestión enzimática directa y una lisis mecánica con esferas de cerámica de 1,4mm seguida de la digestión enzimática, sobre 1 huevo de T. pampeana. En ambos casos el producto se usó como templado para PCR. Los pellets fueron observados al microscopio óptico para evaluar si había efectos estructurales visibles en los huevos después de cada tratamiento. La lisis enzimática sola no fue eficiente por si sola en huevos de T. cati. Los resultados fueron similares con cantidades decrecientes de huevos: 100, 20, 7 y 1 huevos, demostrando la capacidad de extraer ADN a partir de una mínima cantidad de muestra, mientras que para T. pampeana,, los huevos permanecieron con sus plugs polares intactos cuando se observaron al microscopio óptico. El método de lisis mecánica seguido de lisis enzimática fue eficiente para huevos aislados de Trichuris, demostrando la capacidad de extraer ADN a partir de una mínima cantidad de muestra. A partir de estos resultados se puede concluir que este método de extracción es un método sensible y simple, que permite realizar la extracción de ADN de múltiples tubos en pocos pasos y con una mínima manipulación de la muestra, evitando la contaminación cruzada por la apertura de tubos y siendo, además, altamente sensible y baja toxicidad.