CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Que el escaso líquido céfalo-raquideo que circula por el canal central de la médula espinal provenía exclusivamente de la filtración del mismo, a través de las meninges espinales, parecía cosa juzgada. Sin embargo, en el presente trabajo nos propusimos determinar, mediante técnicas modernas de biología molecular y microscopía confocal, la veracidad del mismo. Para ello se anestesiaron ratas Sprague Dawley de 5 meses de edad, se las acomodó en un equipo estereotáxico y se les trepanó la caja craneana para insertar la aguja de una jeringa Hamilton en las siguientes coordenadas relativas al bregma: -0,8 mm anteroposterior, 3,7 mm dorsoventral y ±1,5 mm mediolateral para acceder a los ventrículos laterales o -13,3 mm anteroposterior, 7,5 mm dorsoventral y 0 mm lateral (en la línea media), para acceder a la región del obex de 4to ventrículo, por detrás de los recesos laterales. En las coordenadas establecidas se inocularon 10 μl de una suspensión conteniendo 1011 unidades formadoras de placa/ml de un vector adenoviral conteniendo el gen que codifica la proteína GFP. En algunos animales se inoculó una suspensión de quatum dots (q-dots) solo en el 4to ventrículo. Los animales inoculados con el vector adenoviral fueron sacrificados a las 48 horas. Los inoculados con q-dots fueron sacrificados a los 10 minutos. Luego de perfundir las ratas, se extrajeron todos los órganos nerviosos y se realizaron cortes coronales de 2 mm de espesor, desde los ventrículos laterales hasta el segmento C8. De cada corte coronal se realizaron 5 cortes gruesos (20 µm) con vibrátomo, separados 100 µm entre cada uno. El material comprendido entre el obex y el segmento C1 fue seccionado de manera seriada continua en toda su extensión. Todos los cortes fueron montados sobre portas gelatinizados e incubados durante 15 minutos con el colorante fluorescente de DNA (DAPI). El montaje del cubreobjetos se realizó con gelatina de Kaisser. Todos los cortes fueron observados mediante microscopio confocal (FV1000, Olympus). Para la observación de la expresión de GFP se utilizó el láser 473, mientras que para la observación de los q-dots y el DAPI, se utilizó el láser 405. Los cortes seriados entre el obex y C1 fueron observados mediante contraste de fase. Aquí se pudo constatar por primera vez que existe continuidad entre el canal central del 4to ventrículo y el correspondiente de la médula espinal. Las imágenes confocales mostraron la expresión de GFP (fluorescencia verde) a lo largo de los ventrículos laterales, tercer y 4to ventrículos y conducto del epéndimo hasta el segmento C6, para las inoculaciones realizadas en los ventrículos laterales. La inoculaciones realizadas en la región del obex con el vector viral mostraron expresión de GFP en recesos laterales, canal central del 4to ventrículo y conducto del epéndimo hasta C6. Las inoculaciones con q-dots mostraron fluorescencia roja en el canal central del 4to ventrículo y conducto del epéndimo hasta por lo menos C8. En ningún caso se observó fluorescencia verde (GFP) o roja (q-dots) a nivel de las meninges que recubren la masa cerebral o la médula espinal. Este trabajo demuestra que existe continuidad física y funcional entre el 4to ventrículo y el canal central de la médula espinal.

enviar mensaje