Perfiles de expresión de los genes para ß-galactosidasa y green fluorescent protein transferidos mediante vectores adenovirales en el encéfalo de rata

MOREL, G; ZUCCOLLILI, G, PORTIANSKY EL, GOYA RG.

Mar del Plata

Congreso; Congreso Conjunto de Socidades Biomédicas; 2004

Conjunto de Socidades Biomédicas

Con el objetivo general de aplicar terapia génica en modelos animales de neurodegeneración dopaminérgica senil, se evaluó la efectividad de dos vectores Adenovirales en el sistema nervioso central de la rata: 1) Ad.nls.β-gal, portador del gen de la β-galactosidasa (β-gal) de E. coli; 2) RAd(GFP-TK)fus, portador de un gen para una proteína de fusión entre la green fluorescent protein (GFP) y la timidina kinasa herpética (TK). Se estudiaron los perfiles de expresión in vivo de estos transgenes en la sustancia nigra (SN) e hipotálamo (H), así como la expresión a largo plazo de los mismos. Los vectores fueron inoculados estereotáxicamente (1010 pfu/ml), sacrificando los animales a diferentes días posinyección (pi). Se obtuvieron secciones coronales de 40 µm que fueron analizadas morfométricamente. A los 2 días pi la distribución de la superficie tisular relativa que expresa el transgén de la β-gal (revelado por el método de la X-gal), así como la frecuencia relativa de células marcadas mostraron una distribución acampanada en el eje rostro-caudal con una extensión y una expresión mayor en la SN que en el H, en la sección de ingreso de la inyección viral denominada sección # 0 (ver tabla). Además, en la SN, la expresión de largo plazo de β-gal mantiene su nivel de expresión durante 22 días con tendencia a disminuir. Por otro lado, el estudio cualitativo de los niveles de expresión a largo plazo de GFP, en la SN e H, se mantuvieron sin cambios durante 30 días. SN (n=7) H (n=4) Superficie tisular (%) 13,41±0,08 0,03 9.54±0,05 0,03 Frecuencia celular 223±14 5,29 67,67±47,84 23.92 Distribución (mm) 1,17±0,46 0.17 0,46±0.003 0.001 Se concluye que estos vectores exhiben una expresión sostenida de sus transgenes por un lapso mínimo de 3 ó 4 semanas resultando, por lo tanto, útiles para su empleo en protocolos terapéuticos experimentales de mediano plazo en la SN e H.