Degeneración cortical cerebelosa en bovinos provocada por la ingestión de Solanum bonariense L.: estudio inmunohistoquímico contra la proteína ligadora de calcio calbindina 28k

VERDES JM; BATTES D; MORAÑA A; CALLIARI A; GUTIERREZ F; GIMENO EJ; BARBEITO C; FONTANA PA; ZANUZZI CN; PORTIANSKY E; GUERRERO F; GOICOA A; FIDALGO LE.

Córdoba, España

Congreso; Reunión de la Sociedad Española de Medicina Interna Veterinaria.; 2006

El consumo de Solanum bonariense L. ocasiona una degeneración cortical cerebelosa en bovinos, esta lesión se debe a la degeneración específica de las células de Purkinje, postulándose que la misma ocurre por alteraciones metabólicas específicas demostradas previamente por estudios ultraestructurales e inmunohistoquímicos. La Calbindina-28kD (Cb28k) ha sido considerada como un marcador específico de células de Purkinje. La alteración de esta inmunoreacción se vincula al desarrollo de diferentes enfermedades neurodegenerativas en humanos. El objetivo del presente trabajo fue analizar la expresión de Cb28k, en esta neurodegeneración en cortes provenientes de cerebelos de bovinos intoxicados experimentalmente. A partir de muestras de cerebelos de bovinos intoxicados experimentalmente y de controles, se obtuvieron cortes de 2µm para inmunohistoquímica. Se montaron en portaobjetos cubiertos con 3-aminopropiltrietoxi-silano (Sigma, EUA), fueron desparafinados con xilol, hidratados con alcoholes de concentración decreciente, lavados tres veces en PBS, y recuperados antigénicamente en horno microondas. Como anticuerpo primario se usó un monoclonal anti-Cb28k (clon NLC; Novocastra, UK) diluido 1 en 100. Como sistema de detección inmunohistoquímico se empleó el método del polímero de dextrano (EnVision® Universal Peroxidase, DakoCytomation, USA.). Las células positivas mostraron un color marrón correspondiente a la reacción del 3,3’‑DAB-tetrahidroclorhídrico‑H2O2..  Se empleó hematoxilina como coloración de contraste, previo a la deshidratación y montaje de los cortes. La inmunoreacción contra CbD28k fue altamente específica para las células de Purkinje. Independientemente del grado de intoxicación, en todas las muestras, un gran número de los somas y de sus árboles dendríticos aparecieron fuertemente marcados. En el caso de los terneros intoxicados, independientemente de la gravedad de los síntomas, los esferoides axonales hallados en la sustancia blanca también aparecieron marcados contra CbD28k. La inmunohistoquímica contra Cb28k marcó específicamente las células de Purkinje. En todos los casos se confirmó una fuerte marcación de este tipo neuronal, siendo ésta independiente del grado de degeneración cerebelosa confirmada por evaluación clínica, histopatológica y ultraestructural. Esto no coincide con la disminución progresiva de marcación contra CbD28k en células de Purkinje reportada en otras enfermedades neurodegenerativas.