Proliferation in invasive canine mammary tumors: The role of VEGFR-2 in the autocrine signalization.

DIESSLER ME; IDIART JR; CASTELLANO MC; GIMENO EJ; PORTIANSKY EL

Campo Grande, Mato Grosso do Sul (MS), Brasil

Congreso; XIII Encontro Nacional de Patologia Veterinária (XIII ENAPAVE); 2007

Introducción. En 1971, Folkman et al (1971) postularon la hipótesis que el crecimiento neoplásico depende de un proceso llamado angiogénesis. Las células tumorales intervienen en los eventos angiogénicos, entre otras actividades, mediante la liberación de factores proangiogénicos (como, por ejemplo, la familia de glicoproteínas VEGF). Estos factores de crecimiento (GF) promueven la mitosis y mejoran la sobrevida de las células endoteliales. VEGF activa el receptor VEGFR2 (flk-1) y los efectos río abajo modifican el fenotipo celular. En efecto, las células tumorales VEGF-/- tienen un potencial replicativo limitado y son retenidas en las fases G1 /G0 del ciclo. Sin embargo, la acción mitogénica de VEGF no está restringida a las células endoteliales. Se encontró que estos GF estimularon la proliferación, sobrevida y migración en células no endoteliales como neuronas, condrocitos, etc. El descubrimiento reciente del receptor flk 1 en líneas de células carcinomatosas y en neoplasmas in vivo generó gran interés en la posible función autocrina de este sistema. Así, estos GF podrían estimular la proliferación de las células tumorales mediante otros mecanismos diferentes de la provisión de oxígeno por los neovasos. El objetivo de este trabajo fue medir y correlacionar la expresión de flk-1 y el índice de proliferación (IP) en 20 carcinomas mamarios de caninos. Materiales y Métodos. Se estimó el IP en tejidos provenientes de 20 carcinomas mamarios de caninos (elegidos al azar independientemente del tipo histológico o estado del linfonódulo) detectando la expresión de la coenzima de ADN polimerasa PCNA (anti PCNA, clon PC10, M0879, DAKO Co., Carpinteria). Para evaluar la expresión de flk-1 en las células tumorales se utilizó el anticuerpo Flk-1-A/3-: sc-6251, Santa Cruz Biotechnology, Inc. El sistema de deteccción fue LSAB2 (LSAB 2 System, HRP -DAB-, K0673. DAKO Co., Carpinteria). Para la cuantificación de PCNA se observaron 1000 células por caso (obj. 40X), y se clasificaron como + o –. Se estableció el IP de cada carcinoma (células + /1000 células). Se cuantificó la marcación con flk-1 mediante un programa computarizado de análisis de imágenes (ImagePro Plus, v6.0, Media Cybernetics,USA). Se midieron el porcentaje de tejido inmunomarcado y la densidad óptica celular integrada/mm2 (DOI/mm2) en 20 imágenes digitales capturadas de cada muestra. Esta última es un parámetro de marcación más informativo y se utilizó para el análisis estadístico. La dependencia del IP con respecto de la expresión de flk-1 se evaluó mediante análisis de correlación ya que ambas eran variables no controladas. Se estableció la significación del coeficiente de correlación mediante el modelo de t de Student de dos colas. Resultados y Conclusiones. Los IP de los carcinomas variaron entre 33,8 y 69,4 % (media: 44,75), mientras que los valores de DOI/mm2 se hallaron en un rango entre 207,15 y 49412,88 (media: 14229,5). El coeficiente de correlación entre ambos fue de 0,876 (0: sin ninguna correlación; 1: absoluta correlación). Para dicho valor, el resultado del test de t fue 7,70, que corresponde a p<0.001. Para las muestras estudiadas estos resultados permiten afirmar que la tasa de proliferación de las células carcinomatosas depende en gran medida de la estimulación de VEGFR-2 por parte de VEGF, lo que constituye un patrón de señalización autocrino, como se observa en la magnitud de expresión de este receptor en neoplasmas con altos índices de proliferación.