Calbindin D 28k expression in Purkinje cells inhibits apoptotic cell death pathway in bovine cerebellar cortical degeneration induced by ingestion of Solanum bonariense L.

VERDES JM; MORAÑA A; BATTES D; CALLIARI A; GUTIÉRREZ F; RUIZ P; BARBEITO C; ZANUZZI C; FONTANA PA; PORTIANSKY E; GIMENO EJ; GOICOA A; FIDALGO LE.

Campo Grande, Mato Grosso do Sul (MS), Brasil.

Congreso; XIII Encontro Nacional de Patologia Veterinária (XIII ENAPAVE); 2007

Introducción. Los bovinos que ingieren Solanum bonariense desarrollan una degeneración cortical cerebelosa, caracterizada por vacuolización, degeneración y perdida progresiva de células de Purkinje (Verdes et al. 2006). La Calbindina D 28k (CbD28k) es una proteína ligadora de calcio que es usada como un marcador específico de las células de Purkinje y que su ausencia determina alteraciones de la homeostasis de calcio y muerte neuronal (Haworth et al. 2006, Park et al. 2006). Los objetivos de este trabajo fueron determinar cambios en la inmunorreactividad contra CbD28K y detectar apoptosis en células de Purkinje de cerebelos con degeneración cortical obtenidos de bovinos intoxicados con Solanum bonariense. Materiales y Métodos. Se utilizaron muestras de cerebelos de 6 bovinos intoxicados y 2 bovinos testigos. Para los estudios inmunohistoquímicos se utilizó un anticuerpo primario monoclonal anti-CbD28k (clon NLC, Novocastra, UK), incubándolo por 12 horas y un polímero de dextrano con anticuerpos anti-ratón y peroxidasa (EnVision® Universal Peroxidase, DakoCytomation, USA) incubándolo por 45 minutos, se usó diaminobencidina (DBA) como cromógeno. Para detección de apoptosis, se empleó el método in situ TUNEL (kit ApoTag®, Chemicon, Temecula, CA, USA). Resultados. Se observó mantenimiento de la inmunorreactividad contra CbD28k en aquellas células de Purkinje que aún no habían desaparecido, no encontrándose células apoptóticas en ninguna de las laminas analizadas usando el método TUNEL. Discusión y Conclusiones. La inmunorreactividad a CbD28k fue altamente específica para las células de Purkinje, confirmándose su desaparición progresiva en esta degeneración cerebelosa (Verdes et al. 2006). La inmunomarcación contra CbD28k se mantuvo en todos los casos de bovinos intoxicados, a niveles similares a los encontrados en los animales testigos, siendo esta marcación independiente del grado de degeneración cerebelosa. Esto es similar a lo reportado por Park et al. (2006), aunque otros autores han observado en otros casos, una clara disminución de la inmunomarcación contra CbD28k en las células de Purkinje que permanecían, asociando esta disminución al avance de la neurodegeneración (Haworth et al. 2006). Los resultados negativos obtenidos para identificar células apoptóticas usando el método TUNEL, indican que en nuestras condiciones experimentales las células de Purkinje que progesivamente desaparecen no mueren por apoptosis. De acuerdo con lo reportado por Park et al. (2006), el mantenimiento de altos niveles de CbD28k en las células de Purkinje parece ayudar al mantenimiento de la homeostasis de calcio, pudiendo tener así, un efecto protector contra la muerte por apoptosis, indicando que al menos en nuestras condiciones experimentales la desaparición progresiva de neuronas se debe a muerte por necrosis.