Evaluación de la interferencia de la apoptosis en células de cultivo infectadas con Herpesvirus equino 1

SCROCHI MR; ZANUZZI CN; FUENTEALBA NA; BRAVI ME; GIMENO EJ; BARBEITO CG; PORTIANSKY EL; MUGLIA CI; GALOSI CM

Congreso; Congreso es el de la Sociedad Argentina de Biología; 2013

La muerte por apoptosis puede desencadenarse en respuesta a estímulos inherentes a la célula o como consecuencia de factores externos, como ciertos agentes infecciosos, en cuyo caso la muerte por esta vía sobrevendría como un mecanismo de protección del organismo. Como adaptación a este proceso, muchos virus han implementado diversos mecanismos modulatorios de la respuesta apoptótica para favorecer su replicación dentro de la célula infectada. El Herpesvirus equino tipo 1 (EHV-1) es un agente infeccioso que induce la aparición de signos respiratorios y nerviosos, muerte embrionaria, aborto y síndrome neonatal en equinos. A diferencia de otros alphaherpesvirus, se desconoce si el EHV-1 podría modular la apoptosis celular y qué mecanismos estarían implicados. Hasta el presente, estudios realizados in vitro sólo demostraron un efecto inhibidor sobre neuronas infectadas. Nuestro objetivo fue estudiar el efecto de EHV-1 en cultivos celulares no neurales. Se utilizaron células Madin-Darby bovine kidney (MDBK) infectadas con la cepa AR8 (MOI=10) y luego inducidas a la apoptosis a las 3, 9, y 18 hs posinfección (pi) mediante su incubación con sorbitol 1M, durante 1 h a 37°C (Inf+/Apo+). Para cada uno de los tiempos analizados se realizaron controles positivos y negativos de infección y apoptosis. Se evaluó cuantitativamente la apoptosis celular mediante la tinción con bromuro de etidio y naranja de acridina, y se detectó la exteriorización de fosfatidilserina mediante Anexina V FICT e ioduro de propidio por citometría de flujo. Asimismo, se reconocieron cambios ultraestructurales por microscopía electrónica de transmisión. El análisis conjunto de las técnicas permitió determinar que sólo a las 9 hs pi el índice de apoptosis fue significativamente menor en el grupo (Inf+/Apo+) respecto al control positivo de la misma (Inf-/Apo+). A través de la microscopía electrónica de transmisión se pudo confirmar la presencia del virus y los cambios ultraestructurales característicos del proceso apoptótico. Se concluye que la infección por EHV-1 retardaría la apoptosis de las células infectadas durante la primera etapa del ciclo de replicación viral, efecto que podría favorecer su multiplicación.