Implementación de la técnica modificada de ?CLARITY? para la identificación inmunofluorescente de componentes de la médula espinal de rata

SISTI MS; NISHIDA F; ZANUZZI CN; PORTIANSKY EL

Congreso; XVII Congreso de la Sociedad de Ciencias Morfológicas de La Plata; 2015

El mayor desafío en el estudio de los sistemas biológicos mediante técnicas de inmunofluorescencia es la limitada accesibilidad de los diferentes reactivos a estructuras moleculares presentes en el tejido intacto, debido a que deben atravesar diferentes membranas fosfolipídicas, como la plasmática y otras intracelulares. La dispersión que se verifica en la interfase lípido/agua determina que el tejido intacto sea opaco, limitando la resolución de la imagen obtenible al microscopio. CLARITY (Clear Lipid-exchanged Acrylamide-hybridized Rigid Imaging/Immunstaining/In situ hybridization-compatible Tisue-hYdrogel) es una técnica que permite la remoción de la bicapa lipídica, preservando la información molecular y la estructura nativa del tejido. La técnica original consiste en la fijación del tejido con una mezcla de paraformaldehído y acrilamida, a fin de obtener una malla que preserva la estructura del tejido, y permite la remoción de lípidos a través de una electroforesis en solución de dodecilsulfato de sodio. Nuestro objetivo fue implementar una adaptación de esta técnica, en la que se prescinde de la electroforesis. El material de estudio fue la médula espinal de ratas sanas. Como resultado, se obtuvieron los órganos intactos, transparentes y aptos para la aplicación de análisis inmunofluorescentes y morfométricos. Las muestras obtenidas fueron seccionadas en segmentos de hasta 1 mm de grosor, e incubadas con anticuerpos acoplados a fluorocromos, permitiendo la adquisición de imágenes de mayor resolución, en comparación con las técnicas convencionales. Esta técnica modificada es una herramienta simple, reproducible y que requiere escaso equipamiento. La simplificación de CLARITY incrementará su uso en el estudio de estructuras nerviosas.