Evaluación de la modulación del Herpesvirus equino 1 en la muerte por apoptosis sobre cultivos celulares

SCROCHI MR; ZANUZZI CN; FUENTEALBA NA; BRAVI ME; GIMENO EJ; BARBEITO CG; PORTIANSKY EL; MUGLIA CI; GALOSI CM

Buenos Aires

Jornada; XXXIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2013

El Herpesvirus equino tipo 1 (EHV-1) es un agente infeccioso que produce signos respiratorios, nerviosos, aborto y síndrome neonatal en equinos. A diferencia de otros alphaherpesvirus que modulan la apoptosis celular, se desconoce si el EHV-1 puede ejercer dicha acción y qué mecanismos podrían estar implicados en ella. Hasta el momento solo se demostró un efecto inhibidor, en estudios in vitro, sobre neuronas infectadas. La muerte por apoptosis, un tipo de muerte celular programada, puede actuar como un mecanismo de protección contra agentes infecciosos. Como adaptación a este proceso, muchos virus han implementado diversas estrategias modulatorias de la respuesta apoptótica. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de EHV-1 en cultivos celulares no neurales. Se utilizaron células Madin-Darby bovine kidney (MDBK) infectadas con la cepa AR8 (MOI=10) y luego inducidas a la apoptosis a las 3, 9, y 18 hs posinfección (pi) mediante su incubación con sorbitol 1M durante 1 h a 37 °C (Inf+/ Apo+). Para cada uno de los tiempos analizados se realizaron controles positivos y negativos de infección, de apoptosis y de células sin tratamiento. La apoptosis, se evaluó cuantitativamente mediante la tinción con bromuro de etidio y naranja de acridina y se detectó la exteriorización de fosfatidilserina mediante Anexina V FICT e ioduro de propidio por citometría de flujo. Asimismo, se reconocieron cambios ultraestructurales por microscopía electrónica de transmisión (MET). El análisis conjunto de las técnicas permitió determinar que solo a las 9 hs pi el índice de apoptosis fue significativamente menor en el grupo (Inf+/ Apo+) respecto al control positivo de la misma (Inf-/Apo+). A través de la MET se confirmó la presencia del virus y los cambios ultraestructurales carcacterísticos del proceso apoptótico. Se concluye que la infección por EHV-1 estaría interfiriendo en la muerte por apoptosis de las células infectadas durante la primera etapa del ciclo de replicación viral, efecto que podría favorecer su replicación. Estos resultados preliminares concuerdan con otros ya presentados, en los que evaluamos el clivaje de la citoqueratina 18, proteína blanco de las caspasas efectoras.