Estudio de la oxidasa alternativa mitocondrial de tipo I de Citrus sinensis

DAURELIO, L. D.; JORGELINA OTTADO; ORELLANO, ELENA

Rosario

Congreso; VII Congreso, XXV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2005

La Oxidasa Alternativa Mitocondrial (AOX) es la enzima encargada de la vía alternativa de transporte de electrones desde el ubiquinol al O2, la cual es resistente al cianuro y no está acoplada a la producción de ATP. En plantas está formada por una familia multigénica de codificación nuclear clasificadas en dos grupos: AOX1 y AOX2/3, donde las de tipo 1 actuarían bajo condiciones de estrés biótico y abiótico. El objetivo de este trabajo es analizar las AOX de tipo 1 en Citrus Sinensis var. petrópolis (naranja) y caracterizar la AOX1a. En trabajos previos se clonó un fragmento de la AOX de naranja y por secuenciación se identificaron dos tipos de genes, pertenecientes a las familias AOX 1 y AOX 2a. Utilizando el fragmento correspondiente la AOX 1 como sonda se realizó un Southern Blot de DNA genómico de naranja digerido con la enzima de restricción EcoRI donde se divisaron dos alelos de aproximadamente 2100 y 5600 pares de bases (pb.). Se construyó una subiblioteca con los fragmentos de 2100 pb. del genoma digerido con EcoRI en el vector pBlueScriptII la cual se sometió a screening por hibridización con la misma sonda utilizada en el Southern Blot, detectándose dos clones positivos. El fragmento fue secuenciado y de los 2103 pb., 354 pb. corresponden a la región promotora y 1749 pb. abarcan la región codificante. La región promotora fue analizada con cinco programas de búsqueda de sitios de unión a factores de trasncripción donde se destacan los de respuesta a Ácido Salicílico (TCA) y a patógenos (WRKY y PR-Box). El análisis de la región codificante permitió ubicar los cuatro exones completos, los tres intrones que los separan, la región 5’ y parte de la región 3’ no traducidas. En la secuencia traducida se localizaron dos Cisteínas altamente conservadas (una de las cuales forma el puente disulfuro de homodimerización) y dos regiones EXXH correspondientes al sitio activo. Además utilizando la secuencia de la proteína completa se realizó un análisis filogenético observándose que la misma agrupa con las AOX de tipo 1a. Estos resultados indican que Citrus sinensis var petrópolis tendría al menos dos alelos correspondientes a las AOX1, siendo una de ellas de tipo 1a cuya estructura es tìpica de las AOX formada por 4 exones y cuya región promotora indican una posible participación en distintos tipos de estrés.