Generación de un plásmido recombinante para el silenciamiento de la GTPpasa Rab11 humana

POCOGNONI C, ARAGÓ A, CONTRERAS F, PAVAROTTI M, MAGADÁN J, DAMIANI MT.

Mendoza

Jornada; X Jornadas Virtuales de la Facultad de Ciencias Médicas - Universidad Nacional de Cuyo; 2008

Facultad de Ciencias médicas - Universidad Nacional de Cuyo

La actividad de un gen determinado puede ser suprimida por ciertos RNA de doble hélice llamados RNA de interferencia (A. Fire and Craig C. Mello, Premio Nobel de Fisiología y Medicina 2006). En la mayoría de las células de mamíferos esto da lugar a una fuerte respuesta citotóxica que puede evitarse mediante la utilización de una molécula de RNA sintética de pequeño tamaño (21 a 22 nucléotidos de longitud) conocida como siRNA (short interfering RNA) (Elbashir et al., 2001). Este nuevo mecanismo para la regulación de la expresión génica puede ser utilizado para estudiar la función de diferentes proteínas en biología celular y del desarrollo. Proponemos el diseño y construcción de un vector de expresión en células eucariotas capaz de producir la síntesis intracelular de RNA de interferencia específico para la proteína Rab11a cuya función en la vía fagocítica describió nuestro laboratorio (Leiva et al, 2006).  Esta nueva herramienta muy utilizada en la actualidad en biología celular, permitirá complementar estudios de sobreexpresión de la proteína y sus mutantes activas e inactivas, con los resultados obtenidos cuando se suprime la presencia de dicha proteína mediante el bloqueo de la expresión del gen que la codifica. En este trabajo se utilizaron técnicas convencionales de biología molecular y celular. El vector utilizado fue pSuper.GFP/neo al cual se le insertó el oligonucleótido que diseñamos específicamente para hRab11a.