Caracterización bioquímica y genética de complejos enzimáticos con actividad acetil- y propionil-CoA carboxilasa en Strepromyces coelicolor.

DIACOVICH L., PEIRÚ S., KURTH D., GRAMAJO H.

Buenos Aires.

Conferencia; IX Congreso Argentino de Microbiología.; 2001

Asociación Argentina de Microbiología (A.A.M).

La biosíntesis de metabolitos secundarios mediada por bacterias del género Streptomyces está limitada tanto por la regulación de las rutas biosintéticas como por la disponibilidad de sus moléculas precursoras, malonil-CoA y metilmalonil-CoA. Estos compuestos son sintetizados por la carboxilación de acetil-CoA y propionil-CoA, catalizada por los complejos enzimáticos Acetil-CoA carboxilasa (ACC) y Propionil-CoA carboxilasa (PCC) respectivamente. Los complejos ACC y PCC están compuestos por dos subunidades: una subunidad alpha (AccA2), común a ambos complejos, con capacidad de carboxilar un grupo biotina que se encuentra unido covalentemente a la misma, y una subunidad beta (AccB y PccB para ACC y PCC respectivamente) con actividad carboxil transferasa. El clonado y la expresión en E. coli de los genes codificantes para cada una de estas subunidades permitió su purificación y la reconstitución in vitro de ambos complejos. A través de un ensayo espectrofotométrico utilizando una reacción enzimática acoplada, se determinaron los parámetros cinéticos (Km, Vmax y kcat) de los complejos ACC y PCC reconstituídos a partir de las proteínas puras, para los distintos sustratos (acetil-CoA, propionil-CoA, butiril-CoA, ATP y bicarbonato). Dos proteínas de bajo peso molecular, AccE y PccE, cuyos genes codificantes se encuentran en forma de operon junto a accB y pccB respectivamente, han sido recientemente purificadas. Resultados preliminares indicarían que estas proteínas actúan incrementando la actividad ACC y PCC de los complejos enzimáticos. Se realizaran estudios bioquímicos y físicos, con el objeto de determinar que función cumplen estas proteínas en dichos complejos. Para correlacionar su función in vitro con su función in vivo se obtendran mutantes en los genes codificantes para cada una de estas proteínas.