Construcción de una biblioteca parcial del plásmido críptico movilizable pSmeLPU88b de Sinorhizobium meliloti: búsqueda de determinantes genéticos asociados a la replicación y movilización conjugativa

PISTORIO, M.; GIUSTI, M. A.; LOZANO M., MOLINARI, M. L.; DRAGHI W; Y LAGARES, A.

La Plata, Buenos Aires, Argentina.

Congreso; Segundo Congreso Argentino de Microbiología General (SAMIGE); 2005

La capacidad fijadora de nitrógeno de las asociaciones simbióticas rizobio-leguminosa permite el uso de las mismas desde el punto de vista práctico para la introducción de nitrógeno a suelos de cultivo sin recurrir al uso masivo de fertilizantes químicos. En la práctica de la inoculación de suelos con rizobios deben evaluarse además de las propiedades simbióticas del microorganismo y de la planta hospedadora, los posibilidades de transferencia génica horizontal desde el microorganismo introducido a la población bacteriana natural. En nuestro laboratorio hemos iniciado estudios de caracterización de plásmidos crípticos de S. meliloti transferibles por conjugación como uno de los vehículos más eficientes para la transferencia horizontal de genes intra e interespecífica. En ese marco hemos identificado un sistema binario de conjugación en la bacteria fijadora de N2 Sinorhizobium meliloti constituido por un plásmido de aprox. 40 kb, pSmeLPU88b, movilizable en presencia de un plásmido helper de aprox. 150 kb, pSmeLPU88a. Para aislar y caracterizar funciones de replicación y transferencia del plásmido pSmeLPU88b realizamos una biblioteca parcial del mismo en el plásmido pG18mob2. Mediante secuenciamiento shotgun (20% del total del plásmido) hemos identificado la secuencia codificante de: a) dos replicasas diferentes, b) una proteína con similitud parcial a TraI (conjugation transfer protein) implicada en eventos de quorum sensing para la movilización, y c) una relaxasa (nickase) posible componente del sistema Dtr (DNA transfer and replication) de movilización del plásmido pSmeLPU88b. El analisis de las secuencias clonadas muestra que las dos replicasas podrian corresponder a dos grupos estructurales diferentes (repC / repABC) de Rhizobiaceae. No hemos determinado aun si ambos sistemas, presentes en el mismo plásmido, son funcionales. La relaxasa por su parte mostró la máxima similitud de secuencia con una proteína homóloga de la cepa recientemente secuenciadas Mesorhizobium sp. BNC1 (originalmente designada como Agrobacterium). Hemos iniciado la mutagénesis sitio dirigida de los cuatro elementos identificados para evaluar las consecuencias funcionales sobre la replicación y movilización del plásmido críptico modelo.