ROL DE LA Ca2+-CALMODULINA KINASA II EN LA MUERTE INDUCIDA POR ANGIOTENSINA II: ESTUDIO EN MIOCITOS AISLADOS DE GATO

PALOMEQUE J; VALVERDE CA; VÉLEZ RUEDA JO; SALAS M; MATTIAZZI A

Facultad de Ciencias Médicas, UNLP

Jornada; Jornada de Presentación de Trabajos MEDICINA 2007; 2007

Prosecretaría de Ciencia y Técnica

Introducción: La Angiotensina II (Ang II) modula positivamente la contractilidad en miocitos aislados de gato a través de un aumento del Ca2+i. Por otro lado, en la misma especie y preparado experimental la proteína  kinasa dependiente de Ca2+ y calmodulina (CaMKII) ha sido vinculada con la regulación de la homeostasis del Ca2+, modulando así  el acoplamiento éxito-contráctil, y con la muerte celular, contribuyendo a la pérdida de las unidades contráctiles en el corazón. Ambos procesos, contractilidad alterada y muerte celular, contribuyen a la disfunción contráctil observada en el corazón insuficiente. Además, en la insuficiencia cardiaca tanto los niveles de Ang II como la actividad de CaMKII se encuentran elevados. La Ang II a través del aumento de los niveles de Ca2+i que produce podría activar a la CaMKII  y de esta manera iniciar la cascada de señales apoptóticas que vinculen una molécula con la otra. Más aún, la CaMKII podría también activarse por estrés oxidativo y PKC, moléculas también activadas por la vía de Ang II. Sin embargo esta hipótesis no se ha comprobado hasta el momento. Objetivos: El presente trabajo se propone establecer el nexo entre la Ang II y la CaMKII en la cascada de señalización que conduce a la muerte celular y dilucidar los mecanismos subcelulares que vinculan a ambas  moléculas en una especie (felina) que permita una mejor extrapolación de los resultados al hombre, por las propiedades fisiológicas que la especie en estudio posee. Materiales y métodos: Con el fin de evaluar esta hipótesis se realizaron cultivos de miocitos aislados de gato adulto por 24h en condiciones controles, tratados con Ang II (1 mM) y con Ang II + KN-93 (1 mM), un inhibidor específico de la CaMKII. Se evaluaron viabilidad celular y activación de CaMKII, esta última por Wenstern Blot de P-CaMKII y de P-Thr17 de fosfolamban, un sustrato de la CaMKII activada, y por inmunohistoquímica. Resultados: El tratamiento con Ang II produjo muerte celular  de 61.8 ± 3.8% versus 34.3 ± 3.4 % de las células controles (P<0.05). La mortalidad inducida por Ang II fue anulada por el tratamiento concomitante de los miocitos con el inhibidor específico de CaMKII (KN-93). El aumento de la actividad de CaMKII que se asoció con la muerte celular  inducida por Ang II, se detectó por inmunofluoerescencia y a través  del aumento del 32.6 ± 5.6% de P-CaMKII (P<0.05) y el concurrente aumento de P-Thr17. Conclusiones: Los resultados anteriormente expuestos permiten establecer un vínculo, previamente desconocido, entre Ang II y CaMKII en la vía de señalización para la muerte de las células cardíacas.