INVESTIGADORES
VALVERDE Carlos Alfredo
congresos y reuniones científicas
Título:
Consecuencias funcionales del aumento del secuestro de calcio por el retículo sarcoplasmático cardíaco (RS) en un ratón con pérdida diastólica de calcio
Autor/es:
DI CARLO MN; MAZZOCCHI G; SOMMESE L; VALVERDE CA; VILLAREAL M; SALAS M; PALOMEQUE J; MATTIAZZI A
Lugar:
La Plata
Reunión:
Jornada; Jorandas de Medicina; 2014
Institución organizadora:
Facultad de C. Médicas - UNLP
Resumen:
Introducción: Los ratones con pérdida de calcio (Ca+2)
del RS, por pseudofosforilación constitutiva de uno de los residuos del
receptor de rianodina, RyR2, (mutación S2814D), tienen marcada predisposición a
arritmias ventriculares. Con la finalidad de estudiar si el aumento del
secuestro de Ca+2 por el RS era capaz de disminuir la propensión a
arritmias de estos ratones, generamos una cepa de ratones doble mutantes
(SDKO), resultantes de la cruza de la cepa S2814D con ratones con ablación de
fosfolamban (PLNKO), una proteína cuya ausencia aumenta el secuestro de Ca+2 por el RS.
Objetivos: El objetivo del
presente trabajo fue caracterizar a los ratones doble mutantes (SDKO), paso
previo fundamental para su posterior uso en el estudio de arritmias.
Materiales y métodos: Se realizaron experimentos
en animales vivos (ECG), corazones enteros (Perfusión con la técnica de
Langendorff) y cardiomiocitos aislados (Microscopía Confocal y Cinética de Ca+2
Celular (IonOptix)). Los datos experimentales fueron analizados por medio de un
análisis de la varianza (ANOVA) seguido del test de Tukey.
Resultados: Los resultados indicaron que los ratones SDKO
presentaron modesta pero significativa hipertrofia ventricular (Peso del
corazón/longitud de la tibia) (1,21 ± 0,05 gr/mm*100), respecto a los animales
silvestres (WT (0,87 ± 0,02 gr/mm*100), y S2814D (0,80 ± 0,04 gr/mm*100), y similar a los PLNKO (1,32 ± 0,03 gr/mm*100))
y no presentaron arritmias en condiciones basales. En los estudios funcionales
se encontró que la contractilidad y la carga de Ca+2 del RS fue
mayor en SDKO (velocidad de desarrollo de presión, dP/dt: 3390,60 ± 169,61 mmHg/seg; carga de RS 58,14± 12,08 Unidades
de fluorescencia, (UF), que en S2814D, dP/dt: 2489,43 ± 134,21 mmHg/seg; carga de RS 31,59 ± 4,72 UF (P<
0,05), (característica que reproduce el comportamiento de los PLNKO, por la
ausencia de PLN), y ligeramente menor que en PLNKO (dP/dt: 3826,69 ±
189,80 mmHg/seg; carga de RS 65,57 ± 10,98,0
UF), resultado esperable, debido a la pérdida de Ca+2 por la
pseudofosforilación del RyR2 en los SDKO. La relajación de la presión
desarrollada por el ventrículo izquierdo (Tiempo de Relajación (TR)) y del transitorio de Ca+2 (Tau,
constante de tiempo de la caída del transitorio), resultaron significativamente
aceleradas en SDKO (75,64 ± 2,26 mseg y 141,00 ± 18 mseg, respectivamente) vs.
WT (104,33 ± 1,55 mseg y 370,00 ± 40 mseg, respectivamente) y S2814D (99,13
± 3,85 mseg y 412± 35 mseg,
respectivamente) y fue similar a PLNKO (76,26 ± 1,50 mseg y 128± 8 mseg),
debido a la ausencia de PLN tanto en PLNKO como en SDKO. Se verificó además un
aumento significativo en la fracción de Ca+2 liberado en los SDKO,
una característica que reproduce el comportamiento de los ratones S2814D y que
se atribuye al aumento constitutivo de fosforilación del RyR2. La dependencia
de la amplitud del transitorio de Ca+2 con la frecuencia de
estimulación en corazones intactos fue similar en todas las cepas, en tanto que
los SDKO y PLNKO, no presentaron respuesta inotrópica ni relajante al
isoproterenol.
Conclusiones: Los
ratones doble mutantes presentaron características funcionales propias de la
cruza de las dos cepas originarias y resultan una herramienta sumamente útil
para estudiar el efecto del aumento del secuestro de Ca+2 sobre la
propensión a arritmias producida por fosforilación constitutiva del RyR2.