Efecto protector de cepas de bacterias lácticas sobre la acción de E. coli O157:H7 en cultivos celulares.

HUGO, A. A.; KAKISU, E.J; PÉREZ. P.F; DE ANTONI. G.L

La Plata. Buenos Aires. Argentina.

Congreso; II Congreso de Microbiología General; 2005

SAMIGE

Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es considerado un patógeno asociado a enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs) y causante de casos esporádicos y brotes de diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). Las cepas de STEC causantes de enfermedad en el hombre pertenecen a la categoría de E. coli enterohemorrágica (EHEC). Las mismas son productoras de varios factores de virulencia, entre ellos, las shigatoxinas (stx1 y stx2), la proteína intimina (eae) y la enterohemolisina (hly). E. coli enterohemorrágica O157: H7 es el prototipo de más de 150 serotipos que comparten el mismo potencial de patogenicidad y es el más aislado de los casos de SUH. En Argentina el SUH es endémico y el país posee la mayor incidencia mundial con 8,6 casos por cada 100000 niños menores de 5 años. Es conocido el rol de ciertas cepas de bacterias lácticas en la protección de epitelios contra la toxicidad, adhesión e invasión de patógenos. Dichas bacterias ejercen un efecto protector para el hospedador, entre ellos, impedir la adherencia al epitelio intestinal de microorganismos patógenos o inhibir sus factores de virulencia. El objetivo del presente trabajo fue investigar el posible efecto antagónico de bacterias lácticas potencialmente probióticas frente al daño celular provocado por E. coli enterohemorrágica O157:H7 sobre células Vero en cultivo. El estudio se realizó con cepas de lactobacilos homofermentativos (Lactobacillus plantarum, Lb. delbrueckii subsp. lactis y subsp. bulgaricus) y heterofermentativos (Lactobacillus kefir), junto con una cepa de E. coli O157:H7 aislada de un caso clínico. Se realizaron ensayos de protección de las monocapas celulares frente a la acción de EHEC preincubándolas con lactobacilos. El efecto de la toxina Shiga se evaluó incubando las células Vero con sobrenadante de EHEC. El daño celular se cuantificó por medición de la actividad de la enzima lactato deshidrogenasa (LDH) liberada al medio, tinción con rojo neutro de los lisosomas de las células viables y actividad de la enzima succinato deshidrogenasa mitocondrial (por transformación del MTT a azul de formazán). El desprendimiento celular causado por la incubación de EHEC junto con su sobrenadante se determinó por tinción con cristal violeta. La acción tóxica del sobrenadante de EHEC afectó la viabilidad de las células Vero, lo cual se reflejó en una disminución significativa de la proliferación celular evaluada por MTT. La presencia de los lactobacilos junto con la toxina Shiga aumentó la cantidad de células viables. Asimismo, los lactobacilos ejercieron un efecto protector cuando se evaluó la integridad celular mediante rojo neutro o LDH. El desprendimiento celular causado por la acción combinada de la E. coli EHEC más su sobrenadante fue significativamente menor cuando se preincubaron las monocapas con las cepas de lactobacilos. Las cepas de lactobacilos demostraron distintos grados de protección. Los resultados avalan la eficacia de estos ensayos in vitro para demostrar la acción potencialmente probiótica de bacterias lácticas, como así también, revelar el efecto antagónico de cepas de lactobacilos frente a la acción de EHEC y de toxina Shiga.