TIF2 regula la actividad transcripcional de NF-B a través de la interacción con quinasas de las familias MEK y ERK

NOJEK IM; WERBAJH S; COLÓ GP; RUBIO MF; COSTAS MA

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; I Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

SAIC

Está demostrado que p38 MAPK y las quinasas activadas por mitógenos ERK son requeridas para la actividad transcripcional de NF-kB en respuesta a TNF, aunque no se conoce el modo por el cual estas quinasas regulan la actividad de NF-kB. Por otro lado, demostramos previamente que la sobreexpresión de coactivadores de receptores nucleares aumenta la actividad NFkB en forma dosis dependiente, y la presencia de diversas quinasas en complejo coactivador/NF-kB, siendo el coactivador TIF2 sustrato de la kinasa p38. Con el objeto de estudiar el rol de estas quinasas y el coactivador TIF2 en la actividad transcripcional de NF-kB, analizamos en células HEK 293 transfectadas transitoriamente con vector de expresión de TIF2, estimuladas o no con TNF 20 ng/ml, por medio de ensayos reporteros, traducción in vitro de proteínas, ensayos de inmunoprecipitación y Western Blots las posibles interacciones entre el coactivador y las quinasas involucradas en la activación de NF-kB, así como los niveles de expresión de IkB. Observamos que: 1) la actividad de p38 MAPK y ERK son requeridas para la transactivación de NF-kB dada por TIF2 en ensayos reporteros, en presencia de inhibidores específicos de ambas vías; 2) el bloqueo de p38 inhibe la degradación de IkB 3) TIF2 se asocia con ERK. Las diferentes vías de transducción de señales de NF-kB regularían la activación de activadores o represores, regulando la expresión de genes blanco de este factor de transcripción. Estas observaciones resultarían relevantes para el conocimiento del control de la expresión génica en tumores que sobreexpresan coactivador lado, demostramos previamente que la sobreexpresión de coactivadores de receptores nucleares aumenta la actividad NFkB en forma dosis dependiente, y la presencia de diversas quinasas en complejo coactivador/NF-kB, siendo el coactivador TIF2 sustrato de la kinasa p38. Con el objeto de estudiar el rol de estas quinasas y el coactivador TIF2 en la actividad transcripcional de NF-kB, analizamos en células HEK 293 transfectadas transitoriamente con vector de expresión de TIF2, estimuladas o no con TNF 20 ng/ml, por medio de ensayos reporteros, traducción in vitro de proteínas, ensayos de inmunoprecipitación y Western Blots las posibles interacciones entre el coactivador y las quinasas involucradas en la activación de NF-kB, así como los niveles de expresión de IkB. Observamos que: 1) la actividad de p38 MAPK y ERK son requeridas para la transactivación de NF-kB dada por TIF2 en ensayos reporteros, en presencia de inhibidores específicos de ambas vías; 2) el bloqueo de p38 inhibe la degradación de IkB 3) TIF2 se asocia con ERK. Las diferentes vías de transducción de señales de NF-kB regularían la activación de activadores o represores, regulando la expresión de genes blanco de este factor de transcripción. Estas observaciones resultarían relevantes para el conocimiento del control de la expresión génica en tumores que sobreexpresan coactivador