Interacción regulatoria entre NF-kB, Ciclina D1 y el coactivador RAC3

RUBIO MF; COLÓ GP; ALVARADO CV; ESCARIS C; COSTAS MA

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XLXI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Invetigacion Clinicas; 2006

SAIC

El gen de ciclina D1 (CD1) es requerido para la progresión tumoral y esta sobreexpresado en cáncer de mama. Hemos demostrado previamente que el receptor de estrógenos requiere de la actividad NF-kB para inducir la expresión de la ciclina: el coactivador RAC3, marcador tumoral de este tipo de tumores, es capaz de reclutar en un mismo complejo a ER y NF-κB en el promotor de CD1. La CD1 es capaz de reclutar complejos coactivadores o correpresores. Dado que NF-κB interacciona con RAC3, se quiso determinar si existen complejos conteniendo a CD1 y NF-κB y si afectaban su actividad transcripcional. En células HEK293 (bajo RAC3), T47-D (tumor mama y alto RAC3) se determinó la posible interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 a través de ensayos de co-inmunoprecipitación y Western blot. Además se evaluó el efecto de la sobreexpresión por transfección de CD1 sobre la actividad NF-κB por ensayos reporteros midiendo Luciferasa, así como ensayos de cambio en la movilidad electroforética (EMSA) para determinar niveles de factor disponible nuclear. La actividad NF-κB se indujo con PMA (10 ng/ml). Se observó que existe una interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 en ambas líneas celulares. Además, CD1 ejerce una inhibición dosis dependiente de la actividad NF-κB de hasta el 60% respecto de células transfectadas con vector vacío. No se observaron diferencias en los niveles de NF-κB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB en el promotor de CD1. La CD1 es capaz de reclutar complejos coactivadores o correpresores. Dado que NF-κB interacciona con RAC3, se quiso determinar si existen complejos conteniendo a CD1 y NF-κB y si afectaban su actividad transcripcional. En células HEK293 (bajo RAC3), T47-D (tumor mama y alto RAC3) se determinó la posible interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 a través de ensayos de co-inmunoprecipitación y Western blot. Además se evaluó el efecto de la sobreexpresión por transfección de CD1 sobre la actividad NF-κB por ensayos reporteros midiendo Luciferasa, así como ensayos de cambio en la movilidad electroforética (EMSA) para determinar niveles de factor disponible nuclear. La actividad NF-κB se indujo con PMA (10 ng/ml). Se observó que existe una interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 en ambas líneas celulares. Además, CD1 ejerce una inhibición dosis dependiente de la actividad NF-κB de hasta el 60% respecto de células transfectadas con vector vacío. No se observaron diferencias en los niveles de NF-κB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB interacciona con RAC3, se quiso determinar si existen complejos conteniendo a CD1 y NF-κB y si afectaban su actividad transcripcional. En células HEK293 (bajo RAC3), T47-D (tumor mama y alto RAC3) se determinó la posible interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 a través de ensayos de co-inmunoprecipitación y Western blot. Además se evaluó el efecto de la sobreexpresión por transfección de CD1 sobre la actividad NF-κB por ensayos reporteros midiendo Luciferasa, así como ensayos de cambio en la movilidad electroforética (EMSA) para determinar niveles de factor disponible nuclear. La actividad NF-κB se indujo con PMA (10 ng/ml). Se observó que existe una interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 en ambas líneas celulares. Además, CD1 ejerce una inhibición dosis dependiente de la actividad NF-κB de hasta el 60% respecto de células transfectadas con vector vacío. No se observaron diferencias en los niveles de NF-κB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB y si afectaban su actividad transcripcional. En células HEK293 (bajo RAC3), T47-D (tumor mama y alto RAC3) se determinó la posible interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 a través de ensayos de co-inmunoprecipitación y Western blot. Además se evaluó el efecto de la sobreexpresión por transfección de CD1 sobre la actividad NF-κB por ensayos reporteros midiendo Luciferasa, así como ensayos de cambio en la movilidad electroforética (EMSA) para determinar niveles de factor disponible nuclear. La actividad NF-κB se indujo con PMA (10 ng/ml). Se observó que existe una interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 en ambas líneas celulares. Además, CD1 ejerce una inhibición dosis dependiente de la actividad NF-κB de hasta el 60% respecto de células transfectadas con vector vacío. No se observaron diferencias en los niveles de NF-κB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB y RAC3 a través de ensayos de co-inmunoprecipitación y Western blot. Además se evaluó el efecto de la sobreexpresión por transfección de CD1 sobre la actividad NF-κB por ensayos reporteros midiendo Luciferasa, así como ensayos de cambio en la movilidad electroforética (EMSA) para determinar niveles de factor disponible nuclear. La actividad NF-κB se indujo con PMA (10 ng/ml). Se observó que existe una interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 en ambas líneas celulares. Además, CD1 ejerce una inhibición dosis dependiente de la actividad NF-κB de hasta el 60% respecto de células transfectadas con vector vacío. No se observaron diferencias en los niveles de NF-κB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB por ensayos reporteros midiendo Luciferasa, así como ensayos de cambio en la movilidad electroforética (EMSA) para determinar niveles de factor disponible nuclear. La actividad NF-κB se indujo con PMA (10 ng/ml). Se observó que existe una interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 en ambas líneas celulares. Además, CD1 ejerce una inhibición dosis dependiente de la actividad NF-κB de hasta el 60% respecto de células transfectadas con vector vacío. No se observaron diferencias en los niveles de NF-κB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB se indujo con PMA (10 ng/ml). Se observó que existe una interacción física entre CD1, NF-κB y RAC3 en ambas líneas celulares. Además, CD1 ejerce una inhibición dosis dependiente de la actividad NF-κB de hasta el 60% respecto de células transfectadas con vector vacío. No se observaron diferencias en los niveles de NF-κB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB y RAC3 en ambas líneas celulares. Además, CD1 ejerce una inhibición dosis dependiente de la actividad NF-κB de hasta el 60% respecto de células transfectadas con vector vacío. No se observaron diferencias en los niveles de NF-κB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB de hasta el 60% respecto de células transfectadas con vector vacío. No se observaron diferencias en los niveles de NF-κB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB nuclear en los ensayos de EMSA entre células sobreexpresando o no CD1. Existe una interacción regulatoria entre CD1 y NF-κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB en la cual el factor de transcripción induce la expresión de la ciclina, mientras CD1 inhibe su actividad transcripcional, probablemente a través del reclutamiento de correpresores a nivel de promotores, dado que no se afectan los niveles de NF-κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB nuclear. Dado que el coactivador RAC3 forma parte de los complejos CD1 y NF-κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.κB, su sobreexpresión en distintos tipos de tumores, podría afectar estas interacciones y sería un buen blanco de ataque para el diseño de nuevas terapias.