La sobreexpresión de RAC3 es un factor clave para la transición epitelio mesenquimática inducida por TNF

PANELO L; RUBIO M; FERNÁNDEZ LARROSA P; COSTAS M

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión SAIC; 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínicas

RAC3 (coactivador de la familia p160) es un oncogén cuyasola sobreexpresión aumenta la capacidad proliferativa, resistenciaa apoptosis e induce transición epitelio mesenquimática (TEM).Se ha reportado que TNF es capaz de inducir TEM a través delaumento en la actividad NF-kB en células tumorales de mamaMCF7 que naturalmente sobreexpresan RAC3. Demostramospreviamente que RAC3 es coactivador del factor de transcripciónNF-kB y por tal motivo decidimos investigar si la sobreexpresiónde RAC3 es necesaria para que TNF induzca TEM. Para elloclones de células no tumorales HEK293 obtenidos por transfecciónestable con el vector de expresión (RAC3) o el vector vacío(VV) fueron estimulados por 24hs en ausencia de SFB: Basal,TNF (10ng/ml), SZ (sulfazalacina 500mM inhibidor de NF-kB) oTNF+SZ. Luego se tomaron fotografías y se observó diferenciasmorfológicas cuando RAC3 esta sobreexpresado; además secuantificó el número promedio de proyecciones citoplasmáticas,observándose un aumento del 200% con alto RAC3 con respectoal VV (Basal) e incrementándose a un 400% bajo el estímulo deTNF, efecto inhibido por SZ. Se analizó la actividad MMP porzimografía, a partir de medios condicionados, observándose unaumento del 300% con alto RAC3 respecto del VV (Basal) que seincrementa a un 558% bajo el estímulo de TNF, siendo revertidopor Sz. Por Western Blot se observó un aumento del 100% en losniveles de Vimentina y disminución del 30% de E-cadherina conRAC3 sobreexpresado respecto del VV (Basal) y un aumento del230% y disminución del 40% de las mismas bajo el estímulo deTNF, efectos que fueron bloqueados por SZ. Es de destacar queno se observó efecto de TNF sobre la actividad MMP y niveles deVimentina y E-cadherina cuando RAC3 no está sobreexpresado.Estos resultados sugieren que la sobreexpresión de RAC3 es uncomponente clave para la TEM inducida por TNF.