Comparación del daño oxidativo generado por ciprofloxacina en tres géneros bacterianos

PÁEZ, PAULINA LAURA; BECERRA, MARÍA CECILIA; ALBESA, INÉS

Rosario

Jornada; Jornadas Argentinas de Microbiología; 2008

Asociación Argentina de Microbiología

 La oxidación de proteínas puede ser definida como una modificación covalente inducida directamente por especies reactivas del oxígeno (ERO) o indirectamente por reacción con productos secundarios del estrés oxidativo. Los cambios oxidativos de las proteínas pueden conducir a diversas consecuencias funcionales como inhibición de la actividad enzimática, susceptibilidad incrementada a la proteólisis, agregación, etc. Los productos proteicos de oxidación avanzada (AOPP) constituyen un nuevo marcador de estrés oxidativo. Los residuos carbonilo son generados in vitro e in vivo por una amplia variedad de agentes como oxígeno singlete, ozono, HOCl, radiación ionizante, entre otros, por lo que constituyen uno de los productos de oxidación proteica más comúnmente cuantificados. Se cuantificó la producción de AOPP en cepas ATCC de Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa incubadas con CIP (0,125; 0,4 y 32 mg/mL) durante 2 y 4 h. Los AOPP pueden ser determinados por espectrofotometría utilizando como calibrador una solución de cloramina T, la cual en presencia de ioduro de potasio absorbe a 340 nm, definiendo así un índice de AOPP. Los valores son expresados como meq de cloramina T/mg proteína. El ensayo para la cuantificación de residuos carbonilo consiste en la derivatización con dinitrofenilhidrazina (DNPH), que conduce a la formación de un producto dinitrofenilhidrazona el cual absorbe a 370 nm. Las cepas bacterianas se incubaron durante 2 y 4 h con CIP (0; 0,125; 0,4 y 32 mg/mL). Los resultados se expresaron como mM/mg proteínas. Se apreció un incremento dosis y tiempo dependiente en la producción de AOPP en los tres géneros estudiados. En las bacterias Gram negativas, los residuos carbonilo aumentaron luego de 2 h de incubación con CIP respecto del basal sin antibiótico mientras que a las 4 h de incubación los niveles se redujeron. En S.aureus, los niveles de carbonilos disminuyeron luego de 2 y 4 h de incubación con CIP. Existe una correlación entre la reducción de los grupos carbonilo y el incremento de AOPP lo cual indicaría que el daño oxidativo generado por el antibiótico en bacterias es irreversible ya que se afectan macromoléculas bacterianas como proteínas, entre otras.