Éster de forbol induce translocación de PKC alfa y épsilon estimulando la proliferación de células hipofisarias tumorales GH3B6

PETITI, JP; GUTIÉRREZ S.; PALMERI C.; MUKDSI J. H.; DE PAUL A.; TORRES A.I.

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Anual de la SAIC; 2008

SAIC

La familia de la proteína quinasa C (PKC) constituida por 10 isoformas participa en diferentes procesos tales como proliferación, diferenciación y muerte celular. Las funciones de las PKC dependen del tipo celular, de la isoforma y de su localización intracelular. Nuestro objetivo fue establecer la relación entre la activación y translocación subcelular de PKC alfa y épsilon con la proliferación de células hipofisarias tumorales somatolactotrófica GH3B6 estimuladas con éster de forbol (PMA). Cultivos de la línea GH3B6 se incubaron con PMA (400 nM) por 15min, 3, 5 y 8h. Se cuantificó la proliferación celular por inmunomarcación para BrdU. Para analizar la activación de PKC alfa y epsilon por PMA se determinó la expresión de ambas isoformas en fracción de membrana y citosol por western blot. La identificación a nivel subcelular de PKC alfa y épsilon se realizó mediante inmunocitoquímica por microscopía electrónica. Test estadístico: ANOVA-Fisher. La proliferación de células GH3B6 incrementó un 146% (p<0.001) luego del tratamiento con PMA por 15min con respecto al control, mientras que la exposición prolongada por 3, 5 y 8h disminuyó el porcentaje de células (p<0.001). La estimulación con PMA durante 15 min, activó PKC alfa y épsilon, detectándose una mayor expresión en la fracción de membrana. A nivel de microscopía electrónica, el tratamiento con PMA por 15min indujo una significativa translocación de PKC alfa y epsilon a la membrana plasmática lo cual ha sido correlacionada con la activación de ERK1/2 e inducción de la proliferación celular. Además, PMA promovió la redistribución de ambas isoformas a la membrana nuclear, lo que se asociaría con la fosforilación de laminina B, proteína fundamental en el desensamble de la envoltura nuclear durante el ciclo celular. Los resultados obtenidos demuestran que la activación de la PKC alfa y epsilon y su translocación subcelular inducida por PMA regula la proliferación de células hipofisarias tumorales GH3B6.