Análisis Molecular de cepas mutantes sensibles a péptidos microbicidas en Salmonella enterica serovar Typhimurium

MARTÍN ESPARIZ; SILVANA V. SPINELLI; FERNANDO C. SONCINI

Rosario, Santa Fe, Argentina.

Congreso; XXI reunión anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2001

Sociedad de Biología de Rosario.

El estudio de mecanismos de resistencia a péptidos microbicidas por parte de bacterias patógenas es fundamental para la interpretación de las herramientas utilizadas durante la colonización del hospedador infectado. En este sentido se ha correlacionado la resistencia de Salmonella a diversos péptidos microbicidas, con la habilidad para colonizar el hospedador, y se han identificado algunos factores responsables del incremento de la resistencia a varios de estos péptidos. Con el objeto de ampliar el conocimiento acerca de la resistencia a distintos péptidos por parte de Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium), hemos aislado 22 cepas sensibles a protamina de una biblioteca de 20.000 mutantes insercionales obtenida con el transposón MudJ. La determinación de la secuencia de ADN adyacente a las inserciones reveló la presencia de nuevos genes involucrados en la resistencia a estos péptidos. Se determinó la presencia de inserciones en degS, que codifica para una proteasa de membrana interna de respuesta a estrés periplásmico. Otras inserciones se localizaron en un gen homólogo a isomerasas de azúcares probablemente involucrado en la síntesis o modificación del lipopolisacárido. Esto, sumado a su incapacidad para ser infectadas por el fago P22 y la carencia de motilidad tipo “swarming” sugieren una modificación a nivel de estructuras de superficie en estas mutantes. De hecho, el análisis del perfil del lipopolisacárido en estas mutantes reveló diferencias con el control salvaje, lo cual explica los fenotipos presentados por estas cepas. También se localizaron inserciones del transposón MudJ en un gen con homología a entE, que codifica para la 2,3-dihidroxibenzoato AMP-ligasa involucrada en la síntesis del sideróforo enterobactina en Escherichia coli; y en un gen con homología a ppiB que codifica para una peptidil-prolil cis-trans isomerasa. En ensayos de permeabilidad a dodecil sultafo de sodio se observó que las cepas mutantes en el gen homólogo a ppiB fueron altamente susceptibles al detergente, mientras que las mutantes en degS presentaron una sensibilidad intermedia. Estos resultados sugieren además una relación funcional entre ambos productos génicos. Ambas mutantes están afectadas en el crecimiento en medios definidos. En suma, estos resultados sugieren que la resistencia observada en Salmonella a diversos péptidos catiónicos sería resultante de numerosas alteraciones a nivel de la superficie bacteriana, y no cursaría por procesos péptido-específicos.