Biosensor para el Diagnóstico de la Enfermedad de Chagas: Optimización y Validación del Método

RIBONE, M. E.; BELLUZO, M. S.; MARCIPAR, I. S.; LAGIER, C. M.

Villa de Merlo, San Luis

Congreso; III Congreso Argentino de Química Analítica; 2005

Considerando que la Enfermedad de Chagas afecta entre 18 y 20 millones de personas sólo en Latinoamérica, el desarrollo de métodos para su diagnóstico que sean confiables, más  económicos y versátiles que los actuales, cobra relevancia para la salud pública. Con el objeto de avanzar en este sentido, se diseñó un bioelectrodo que permitiera la detección de anticuerpos contra el parásito Trypanosoma cruzi (T. cruzi), presentes en pacientes con Enfermedad de Chagas. El esquema del método propuesto corresponde al de un ELISA indirecto en el cualse reemplaza el soporte del antígeno (Ag), usualmente placas de poliestireno, por electrodos de oro con los que se realiza la detección electroquímica, substituyendo la convencional  espectrofotométrica. Específicamente, se realiza una amperometría a 80 mV, en presencia del sustrato de la enzima y de ferrocenometanol, utilizado como mediador soluble.Se ensayaron diferentes condiciones para el armado del biosensor procurando optimizar el método. En una primera etapa se trabajó utilizando como Ag homogenado de parásito (HP) T. cruzi. En una segunda etapa, se utilizaron dos proteínas de T. cruzi obtenidas por tecnología de DNA recombinante. Se caracterizaron las fracciones proteicas, tanto del HP como la de las proteínas recombinantes (PR), para hallar sus respectivos puntos isoeléctricos, que resultaron estar en el rango 5,9-6,2. Se ensayó adsorber electrostáticamente éstos Ag sobre el electrodo de oro modificado con dos tioles diferentes, trabajando a pH 5. También se ensayó el armado del electrodo uniendo las proteínas antigénicas covalentemente via activación con carbodiimida.Losresultados obtenidos coinciden con el diseño de ELISA indirecto, esto es, la señal aumentó con el incremento de la concentración de anticuerpo anti-T. cruzi. Se ensayó el desempeño del biosensor para uso diagnóstico, evaluándose los resultados obtenidos para un panel de sueros. El panel incluyó sueros positivos y negativos para Chagas, sin reactividad comprobada para otras parasitosis, así como sueros negativos para Chagas y positivos para leishmaniasis. En el caso de los electrodos ensamblados utilizando el HP como Ag sensibilizante, se obtuvieronresultados falsos positivos para los sueros leshmaníasicos ensayados. No obstante, en el caso de sensibilización de los electrodos con las dos PR, ninguno de los sueros leshmania positivos presentaron reacción cruzada. La sensibilidad y especificidad de los biosensores electroquímicos armados estuvieron en el mismo orden que aquellas obtenidas cuando se realizaron ELISA convencionales, no habiéndose encontrado diferencias significativas entre ambos métodos. Estos resultados son muy promisorios porque posibilitan no sólo la utilización del dispositivo en el campo, sino que además se abren expectativas sobre la posible utilización para automatización.