Optimización de la expresión y purificación de la proteína P22 de T. gondii para la detección de toxoplasmosis aguda

PEROTTI, J.; DIEZ, C.; BELLUZO, M. S.; LAGIER, C. M.; MALAN BOREL, I.; MARCIPAR, I. S.

Córdoba, Argentina

Congreso; Reunión anual de protozoologia y enfermedades parasitarias; 2006

La proteína P22 de Toxoplasma gondii es un antígeno útil para la discriminación de toxoplasmosis aguda. Sin embargo, es altamente insoluble y su obtención muy dificultosa para su aplicación en inmunoensayos. Además, como ocurre con otros antígenos recombinantes, su desempeño es muy variable cuando se obtiene por diferentes procesos de expresión y purificación. Para obtener la proteína P22 que permita discriminar eficientemente toxoplasmosis aguda de crónica, en este trabajo se ensayó un primer protocolo, utilizando el  vector pMalc2 y se obtuvo una expresión soluble que se pudo purificar por afinidad a amilosa. Con un segundo protocolo, utilizando el vector pET32a, el producto no fue soluble, por lo que se elaboró un esquema de purificación lavando los cuerpos de inclusión con Tritón y luego solubilizándolos con SDS para luego realizar una purificación por separación electroforética en gel. Los antígenos obtenidos a partir de ambos protocolos propuestos fueron comparados por enzimoinmunoensayos. Para la evaluación, se utilizaron sueros de individuos no infectados o con toxoplasmosis tanto crónica como aguda. Ajustando la línea de corte para no obtener reactividad frente a crónicos o no infectados, la sensibilidad para la detección de los sueros agudos fue del 54 % y 77 % para el primer y segundo protocolo, respectivamente. Por lo tanto. si bien la expresión con pMalc2 permitió rendimientos de 57.0 mg/l frente a 0,5 mg/l de cultivo con pET32a, el desempeño de la proteína obtenida con el segundo protocolo propuesto fue muy superior.