Caracterización biofísica y toxicológica ex vivo del complejo dendrímero-vismodegib como potencial agente antitumoral

D. E. YBARRA; LUIS F. BARRAZA; SILVIA DEL V. ALONSO; JORGE MONTANARI; ALVIRA, F. C.

Cudad Autonoma de Buenos Aires

Congreso; Fronteras en Nanobiotecnologia III; 2022

Facultad de Farmacia y Bioquimica

Sibien se han mejorado los tratamientos del cáncer, aún siguen siendo un desafíoen cuanto a los efectos colaterales que estos generan. Un ejemplo de esto esVismodegib (VDG), un antineoplásico de última generación indicado para elcarcinoma basocelular (CBC), cuyos efectos secundarios podrían ser disminuidospor medio de nanotecnología farmacéutica. En este sentido, los dendrímerospoliamidoamina (D PAMAM) de generación 4.0 y 4.5 (DG4.0 y DG4.5,respectivamente) son macromoléculas en cascada cuya arquitectura permite laformación de complejos con drogas de interés farmacológico. El objetivo de estetrabajo es obtener y caracterizar fisicoquímicamente los complejos DG4.0:VDG yDG4.5:VDG, y evaluar la hemotoxicidad de estos.             Los dendrímeros comerciales se combinaroncon VDG en solución metanólica. Luego de la incubación, se evaporó el solventeorgánico y se reconstituyeron los filmscon PBS a pH=7.4.  De esta manera, seobtuvieron complejos DG4.0:VDG y DG4.5:VDG, que contienen 5-6 moléculas de VDGpor D PAMAM.  Los tamaños hidrodinámicos(THD) de estas suspensiones fueron medidos mediante Dynamic Light Scattering encontrando dos poblaciones en amboscomplejos. En mayor proporción (~80%) se encuentran agregados de 489 ± 55 nm y267 ± 162 nm, para el DG4.0:VDG y DG4.5:VDG, respectivamente. La poblaciónminoritaria (~20%) corresponden a dendrímeros libres (entre 4-6 nm), y esto lohemos podido corroborar ya que monitoreamos los THD en todos los pasos de lacomplejación. Cuando los D PAMAM se pusieron en contacto con VDG en metanol, elTHD se incrementó de 25 a 35 veces, confirmando una interacción D:VDG. Paraconocer dicha interacción, hemos realizado un espectro FT-IR de ambos complejosen PBS en los que se observaron corrimientos correspondientes a los grupos: sulfona,amida (tensión N-H y carbonilo), C-Cl y en las bandas C=C aromáticas de VDGcuando esta molécula se asocia tanto con DG4.0 como con DG4.5. Además, lasintensidades de los corrimientos sugieren una interacción débil entre eldendrímero y la droga. Encuanto a la cinética de liberación invitro, hemos llevado a cabo una microdiálisis ad hoc a pH 5.0 (condición tumoral) y 7.4 (condición fisiológica).Por un lado, a pH tumoral observamos una liberación del 50% de VDG a las 4 hcon el complejo DG4.0:VDG, mientras que el complejo DG4.5:VDG recién liberó el50% a las 20-24 h. Por otro lado, en condiciones fisiológicas, alrededor del80% se liberó luego de las 10 h, alcanzando un plateau en ambos complejos. Finalmente, evaluamos la toxicidad ex vivo en glóbulos rojos (GR) humanos,y no reportamos efectos hemolíticos ni a 4 ni a 24 h de tratamiento. Asimismo,tampoco se observaron cambios morfológicos en los GR. En conclusión, hemos caracterizado lainteracción de DG4.0 y DG4.5 cuando forman complejos con VDG. Además, nuestrosresultados indican que en las inmediaciones del tejido tumoral, el complejo conDG4.5 libera  VDG de modo lento ysostenido. Por último, los complejos no presentaron hemotoxicidad en lasconcentraciones ensayadas.