Desarrollo de nuevos test rápidos para la detección serológica de infección por Escherichia coli O157 y O145

STELLA MARIS LANDIVAR; LUCIANO J. MELLI; BASCHKIER, ARIELA; MILIWEBSKY, ELIZABETH; CHINEN, ISABEL; COMERCI, DIEGO J.; JUAN E. UGALDE; ANDRÉS E. CIOCCHINI

Buenos aires

Simposio; Primer Simposio Argentino sobre Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC/VTEC) responsable del Síndrome Urémico Hemolítico; 2022

La infección por Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC) es la principal causa de síndrome urémico hemolítico (SUH) típico. El serogrupo STEC de mayor prevalencia asociado a casos esporádicos y brotes de diarrea sanguinolenta (DS) y SUH en diferentes partes del mundo es E. coli O157:H7, seguido de los serogrupos O145, O121, O103, O111, O45 y O26. En la actualidad, la asociación de la infección por STEC con el SUH se realiza a través del aislamiento y caracterización de la bacteria y la detección de la toxina Shiga (Stx). Además, se ha demostrado que la incorporación de pruebas serológicas en el algoritmo diagnóstico aumenta significativamente la capacidad de asociación del SUH-STEC. Previamente, en nuestro laboratorio se desarrolló una familia de kits de ELISA comerciales para la detección de anticuerpos específicos contra los serogrupos de mayor prevalencia de STEC en muestras de suero. Los mismos se basan en la utilización de glicoproteínas recombinantes que poseen el polisacárido O del lipopolisacárido (LPS) correspondiente unido a un carrier proteico. Estos antígenos son serogrupo específicos y evitan los falsos positivos por epítopes presentes en el lípido A-core del LPS y compartidos por otras bacterias Gram negativas. En los últimos años los sistemas inmunocromatográficos (lateral flow immunoassay, LFIA) tomaron gran relevancia como pruebas para el diagnóstico rápido y en el lugar de diferentes enfermedades infecciosas. En este trabajo, se desarrollaron test rápidos inmunocromatográficos para la detección de anticuerpos IgM específicos anti-polisacárido O157 (LFIA-O157) y anti polisacárido O145 (LFIA-O145) utilizando como antígeno las glicoproteínas recombinantes AcrA-O157 y AcrA-O145, respectivamente. La validación se realizó con 114 muestras de suero de pacientes pediátricos con diagnóstico de SUH o DS asociado a STEC confirmado por aislamiento de la bacteria, y muestras de suero de pacientes del mismo grupo etario con otras patologías no relacionadas (muestras negativas). La sensibilidad y especificidad para el LFIA-O157 fue de 96% y 93% y para el LFIA-O145 de 100% y 82%, respectivamente. Con el objetivo de completar la evaluación de desempeño, se realizó un ensayo simple‐ciego retrospectivo que incluyó un panel de 106 muestras de suero provenientes de pacientes con SUH y/o DS con aislamiento de STEC y/o detección de Stx y pacientes con SUH y/o DS sin aislamiento de STEC ni detección de Stx. En este análisis se obtuvieron valores de sensibilidad y especificidad consistentes con los obtenidos en la validación interna del prototipo. Por otra parte, mediante el análisis de sueros de pacientes con información de los días post-inicio de los síntomas, se logró detectar el 100% de los casos positivos luego de los 3 días de iniciados los síntomas y hasta el 70% de los casos positivos antes de los 3 días. Consideramos que las pruebas inmunocromatográficas desarrollados para la detección de anticuerpos específicos anti-polisacárido O157 (LFIA-O157) y anti-polisacárido O145 (LFIA-O145) permiten la asociación de SUH/DS a la infección por E. coli en forma rápida y temprana, y podrían convertirse en una herramienta eficaz para evitar retrasos en el tratamiento de soporte o la aplicación de un tratamiento específico.