MLH1 y MSH2 interactúan con HSP27 y HSP72 en células tumorales de colon humano expuestas a hipertermia y cisplatino

SOTTILE, M. L.; LOSSINO A.; FANELLI M. A.; CUELLO CARRION F. D.; CIOCCA D. R.; VARGAS ROIG L. M.; NADIN S. B.

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión Científica Anual 2013 Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS), XLV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE); 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS), Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE)

En los últimos años se ha reportado la vinculación entre proteínas de golpe de calor (HSPs) y componentes de diversos sistemas de reparación del ADN, como por ejemplo BER y NER; habiéndose observado que las HSPs pueden asistir a estos mecanismos en la corrección de daños. Hemos reportado la colocalización entre las proteínas hMLH1 y hMSH2 con HSP27 y HSP72 en linfocitos humanos de sangre periférica. hMLH1 y hMSH2, integrantes del sistema Mismatch Repair (MMR), son esenciales en el reconocimiento del daño causado por cisplatino (CPt). El propósito de este trabajo consistió en corroborar la interacción entre hMLH1, hMSH2, HSP27 y HSP72 en células de adenocarcinoma de colon humano, deficientes y no deficientes en el sistema MMR, expuestas a hipertermia (H) y/o CPt. Las líneas celulares HCT116 y HCT116+ch2 (hMLH1 deficientes) y HCT116+ch3 fueron expuestas a: 1- CPt, 10 µM (1 h). 2- H+CPt, CPt 10 µM (1 h) 24 hs después de un tratamiento térmico a 42°C (1 h). Las células fueron fijadas a las 0, 2, 4 y 24 hs después del CPt para estudios de inmunofluorescencia confocal. Para inmunoprecipitación cruzada se utilizaron muestras control, tratadas con CPt e H+CPt cosechadas 24 hs post-CPt. El coeficiente de colocalización (Pearson) entre hMLH1 y HSP72 y los coeficientes de Manders, en la línea HCT116+ch3 expuesta a H+CPt, aumentaron significativamente en relación al control a las 24 hs del CPt (P= 0,0153 y P= 0,03, respectivamente). También se verificó colocalización entre: hMLH1-HSP27, hMSH2-HSP27 y hMSH2-HSP72 (Pearson>0,5). Mediante inmunoprecipitación observamos interacciones directas entre: hMLH1-HSP27, hMLH1-HSP72, hMSH2-HSP27 y hMSH2-HSP72. Nuestro trabajo demuestra por primera vez la interacción entre componentes del sistema MMR y las proteínas HSP27 y HSP72. Estas HSPs podrían colaborar con el sistema MMR en la reparación de los daños inducidos por cisplatino. Este hallazgo constituye el punto de partida para futuros estudios funcionales.