Estrategia para confirmar la presencia y asociación de microorganismos identificados en Lutzomyia longipalpis, vector de Leishmaniasis Visceral.

LORENA G. CALIGIURI; CHRISTINA B. MCCARTHY

Resistencia

Jornada; XIV Jornadas Argentinas de Microbiología y 3ra Jornada de Microbiología e Infectología del NEA; 2011

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Introducción. Los flebótomos son insectos de granimportancia médico-veterinaria y laleishmaniasis, causada por protistas tripanosomátidos del género Leishmania, es la más devastadora de las enfermedades quetransmiten. La leishmaniasis es un serio problema de salud pública, con unaprevalencia global estimada en 12 millones de casos y una incidencia anual de1,5-2 millones de casos. Se estima que la leishmaniasis visceral (LV) causa500.000 de estos casos y más de 59.000 muertes por año (Desjeux, 2004). En América Latina, LV escausada por Leishmania infantum chagasi y su principal vector es Lutzomyia longipalpis. Este flebótomo sólo se encuentra en el Nuevo Mundo, desde Méjico hastaArgentina (Grimaldi et al., 1989). Entre 1925 y 1989, en Argentina se reportaron14 casos humanos de leishmaniasis pero ninguno fue atribuído a Le. chagasi y, adicionalmente, sólo hubo2 registros aislados de Lu. longipalpissin reporte de LV (en 1951 y 2000) (Salomon etal., 2001). Sin embargo, el panorama ha cambiado sustancialmente y ya se hadescripto el primer foco de LV en Argentina (Salomon et al., 2008). Actualmente existe un interésgeneralizado en la utilización de microorganismos como agentes para el controlbiológico de vectores de diversas enfermedades (Durvasula et al.,1997; Marzorati et al., 2006). Los microorganismosasociados a los vectores podrían ejercer un efecto patogénico directo sobre elhospedador, interfiriendo con su reproducción o reduciendo su competenciavectorial (Beard et al.,2001; Zabalou et al., 2004). Sumado a esto, lamicrobiota tiene roles importantes y muchas veces esenciales durante elcrecimiento y desarrollo de muchas especies de insectos. En este sentido, recientementese realizó la primer descripción de taxones asociados a adultos de Lu. longipalpis de zonas endémica(Posadas, Misiones, Argentina) y no endémica (Cueva de Lapinha, Minas Gerais,Brasil) de LV, utilizando unenfoque metagenómico no sesgado mediante secuenciamiento de segunda generación (McCarthy et al., 2010). En esteestudio se identificaron secuencias de bacterias, hongos y protistasapicomplejos, entre otros.Objetivos. Desarrollar una estrategia para confirmar la presencia y asociación delos taxones originalmente identificados en Lu. longipalpis adultos dezonas endémica (Posadas, Argentina) y no endémica (Cueva de Lapinha, Brasil) deLV en un mayor número de muestras.Materiales y Métodos. Enbase a las secuencias encontradas de taxones asociados se diseñaron cebadores específicosutilizando Oligo 7. La eficiencia y especificidad de los cebadores se ensayó enreacciones de amplificación donde se utilizó como molde el cDNA extraído de losejemplares adultos de Lu. longipalpis de zonas endémica(Posadas, Argentina) y no endémica (Cueva de Lapinha, Brasil) de LV.Posteriormente, los productos de amplificación obtenidos fueron clonados ysecuenciados. Resultados y Conclusiones. Se diseñaron 33 cebadores para identificar los microorganismospreviamente encontrados en Lu. longipalpis. Secomprobó la eficiencia y especificidad de los cebadores diseñados para amplificarsecuencias de protistas apicomplejos. Los fragmentos amplificados a partir deejemplares adultos de Lu. longipalpisfueron clonados y posteriormente secuenciados. Los resultados indicarían que laestrategia desarrollada para establecer la asociación y significancia de losmicroorganismos originalmente identificados por pirosecuenciación es sensible yespecífica.