Análisis metagenómico de la microbiota intestinal de larvas de Spodoptera frugiperda.

NATALIA A. CABRERA; EDUARDO G. VIRLA; CHRISTINA B. MCCARTHY

Resistencia

Jornada; XIV Jornadas Argentinas de Microbiología y 3ra Jornada de Microbiología e Infectología del NEA; 2011

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Introducción: En Argentinahay muchas plagas que siguen produciendo pérdidas económicas significativas ypara las que el control con insecticidas y variedades resistentes es sólo unpaliativo. En particular, Spodopterafrugiperda (Sf) (OrdenLepidoptera, Familia Noctuidae) es una de las plagas que más daño causa en laproducción Argentina de maíz. Actualmente, esta plaga se controla con plantas transgénicas einsecticidas, pero la aparición de resistencia ha hecho que la utilización deentomopatógenos como agentes de control sea una alternativa atractiva. En estesentido, la microbiota del tracto digestivo de los insectos deriva del ambientecircundante y puede influenciar su ciclo de vida.. Por ello, un inventario de la microbiota asociada a Sf ayudaría a comprender las variacionesanuales y regionales de esta plaga (Gonzalez-Ceronet al., 2003) y a desarrollar estrategias novedosas para sucontrol (Dillon y Dillon, 2004). Sin embargo, las estimacionesactuales indican que más del 99% de los microorganismos presentes en muchosambientes naturales no son cultivables y, por lo tanto, no están fácilmentedisponibles para realizar estudios básicos o biotecnológicos (Amann et al., 1995). La metagenómicafacilita el análisis cultivo-independiente de las comunidades microbianas (Handelsman, 2004), un enfoque que no requiere suposiciones previas sobre la composición dela comunidad blanco. Objetivo: Caracterizarla microflora asociada a intestinos de larvas de Sf para identificar potenciales bioinsecticidas.Metodología: Larvas de Sf criadas enbioterio provenientes de ?El Manantial? (Departamento deLules, Tucumán) de cuarto y quinto estadio, se sacrificaron por exposición a bajas temperaturas. Los intestinos se extrajeronmediante corte longitudinal y conservaron en PBS 1X a -20oC hasta suprocesamiento.Se ensayó y optimizó un protocolo para la extracción de ADN genómico bacteriano.Posteriormente, se amplificaron secuencias 16S ADNr a partir del ADN extraído utilizandolos cebadores 8F y 1492R (Crump et al., 1999; Stackebrandt y Liesack,1993). Los productosde amplificación obtenidos fueron clonados y secuenciados.Resultados y Conclusiones: Se logró extraer ADN genómico bacteriano a partir de intestinos delarvas crecidas en bioterio. La pureza y concentración de este ADN fueron adecuadaspara amplificar secuencias 16S ADNr. Los productos de amplificación fueronexitosamente clonados, construyéndose una biblioteca metagenómica bacterianacompuesta por 107 clones. Este trabajo representa el primer análisismetagenómico de la composición bacteriana de intestinos de larvas de Sf.